鸡血藤醇提物降脂活性成分的初步研究

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目的:考察鸡血藤醇提物对高脂饮食引起的大鼠高脂血症血脂水平、肝脏脂质代谢及抗氧化酶活力的作用,并结合病理学对鸡血藤的保肝作用进行研究,以期能够明确鸡血藤提取物对高脂血症大鼠的影响,并对其机制和活性成分进行初步探讨。方法:1、鸡血藤中原花青素的提取、纯化及抑制胰脂肪酶活力部位的筛选1.1鸡血藤原花青素含量测定方法的建立采用浓硫酸-香草醛法显色,进行优化,对显色条件进行优化后,利用该测定方法。1.2鸡血藤原花青素提取及纯化工艺研究采用单因素考察方法对鸡血藤原花青素提取工艺进行优化,并对不同采收期鸡血藤进行含量测定。利用大孔树脂对鸡血藤原花青素粗提物进行纯化。1.3鸡血藤原花青素抑制胰脂肪酶活力研究建立原花青素胰脂肪酶活力抑制测定方法,对不同流分进行纯度测定及胰脂肪酶活力抑制测定。1.4鸡血藤原花青素纯化物对LPS诱导的小鼠巨噬细胞炎症模型作用的影响建立细胞炎症模型,考察鸡血藤醇提物、原花青素纯化物及儿茶素对该模型的影响。2、鸡血藤醇提物对大鼠高脂血症血脂水平及抗氧化酶活力的影响选用SPF级SD雄性大鼠,体重180±20g,适应性喂养1周后,空腹眼眶静脉丛取血,按照TC、TG及体重随机分成6组,每组6只,分别为:正常组,模型组,辛伐他汀组,鸡血藤低、中、高剂量组(剂量分别为2、4、8g·kg-1·d-1),采用喂饲高脂饲料复制高血脂症大鼠模型,造模同时预防性给药,12周后采血取肝脏,测定各组大鼠血清脂质水平、肝脏脂质代谢、抗氧化酶活力及观察肝组织病理变化。结果:1、鸡血藤原花青素的纯化及抑制脂肪酶活力部位的筛选最佳显色条件为:20 g/L香草醛甲醇溶液,30%硫酸甲醇溶液,室温避光反应15min后测定Aw,扣除空白。最佳提取工艺为:80%乙醇按照料液比1:15的比例回流提取90 min。不同采收期鸡血藤进行含量测定发现5月份鸡血藤原花青素含量最高。从静态吸附与解析试验中筛选出了 X-5大孔树脂,纯化鸡血藤原花青素。考察了上样流速及上样量,上样流速为2BV/h,上样量为8BV。不同浓度乙醇洗脱下来的原花青素纯度不同,抑制胰脂肪酶活力的作用也不同。其中以50%乙醇洗脱下来的纯化物纯度最高,达94.67%;50%的纯化物抑制率最高,达55.9%;纯度与抑制率呈正相关关系。鸡血藤醇提物、原花青素纯化物及儿茶素均对该细胞模型有一定的抗炎作用,且鸡血藤醇提物效果优于原花青素提取物及儿茶素。2、鸡血藤对大鼠高脂血症血脂水平及抗氧化酶活力的影响在鸡血藤醇提物调节血脂的实验中,与模型组比较,鸡血藤醇提物显著降低血清TC、TG、LDL-C、AI、R-CHD,升高 HDL-C、HDL-C/TC。与模型组比较,鸡血藤醇提物显著提高血清CAT活力,但对NO、AKP及SOD无显著性影响。鸡血藤醇提物显著降低肝脏TC、TG,明显升高GSH-PX活力,但对CAT无明显影响。高剂量组有良好的保护肝脏的作用。病理切片同样表明,鸡血藤醇提物对肝脏具有保护作用。结论:鸡血藤粗提物及纯化物对胰脂肪酶均有抑制作用,抑制率与纯度呈正相关关系。鸡血藤醇提物体外抗炎效果优于纯化物。鸡血藤醇提物能显著降低脂质水平及提高过氧化物酶活力,具有良好的预防高脂血症及脂肪肝作用。
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