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为寻找适合临床应用的新型多药耐药(MDR)逆转剂及逆转方法,本课题在前期体外研究的基础上,构建了多药耐药性人绒毛膜癌裸鼠移植瘤模型,通过体内实验进一步观察了马鞭草抗绒癌有效成分4’-甲醚-黄芩素(4’-M-S)对人绒毛膜癌多药耐药性的逆转作用,并初步探讨其作用机理,将中药抗肿瘤作用及相关机制的研究提升到动物整体水平。本研究分为两部分:一、多药耐药性人绒毛膜癌裸鼠移植瘤模型的建立采用皮下接种细胞悬液法,利用耐药性人绒毛膜癌JAR/VP16细胞系制备裸鼠移植瘤模型。细胞接种后8～10 d即陆续开始成瘤,成瘤率为100%(20/20),移植瘤生长稳定;HE染色光镜及透射电镜观察发现瘤组织细胞形态及超微结构与人绒毛膜癌耐药细胞系JAR/VP16相似;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)结果表明移植瘤组织mdr1 mRNA高表达;流式细胞术(FCM)检测结果提示移植瘤组织对细胞内罗丹明123(Rhodaminel23,Rh123)有显著的外排作用。以上结果表明,运用此法建立的裸鼠移植瘤模型,与人绒毛膜癌多药耐药细胞系JAR/VP16的组织学特性和生物学特点相近,能直观反映绒癌的生长过程,可作为耐药性绒癌研究的在体实验模型。二、4’-甲醚-黄芩素对耐药性人绒毛膜癌裸鼠移植瘤的耐药逆转作用依照前述方法建立耐药性人绒毛膜癌裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、依托泊苷(VP16)组、4’-M-S组和4’-M-S+VP16组。动态观测各组移植瘤的生长情况,发现4’-M-S与VP16联合用药,可显著抑制耐药性人绒毛膜癌裸鼠移植瘤体积的增长,改善荷瘤鼠生存质量并延长裸鼠存活时间;光镜及透射电镜观察均表明瘤细胞有早期凋亡的形态学改变,流式细胞术检测发现肿瘤细胞凋亡率明显增高;RT-PCR、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结果显示,瘤组织中mdr1 mRNA、1rp mRNA及其编码的蛋白P-gp和LRP表达均显著下降。以上结果说明:4’-M-S能有效逆转裸鼠移植瘤组织对化疗药物VP16的耐受性,其机制可能与4’-M-S诱导细胞凋亡和下调耐药相关基因mdr1 mRNA、1rp mRNA及相应蛋白P-gp和LRP的表达有关。综上所述,本文成功建立了耐药性人绒毛膜癌裸鼠皮下移植瘤模型,为人绒毛膜癌多药耐药机制及其逆转的在体研究奠定了实验基础;同时体内实验表明,4’-M-S能有效逆转移植瘤对化疗药物VP16的耐受性,诱导细胞凋亡,并下调耐药相关基因mdr1 mRNA、1rpmRNA及相应产物P-gp和LRP的表达。