实验性蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛兔海马组织中bcl-2和bax mRNA的表达

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蛛网膜下腔出血(SAH)是常见的出血性脑血管急症,其最大危害在于继发脑血管痉挛(CVS),使神经组织产生缺血、缺氧性损伤,致残率、死亡率高。有关蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的研究已持续了数十年,至今仍未完全阐明,没有形成完整的理论体系,临床上缺乏有效的、针对性治疗方法。近年来有学者认为蛛网膜下腔出血(SAH)后凋亡(即程序性细胞死亡,PCD)对迟发性神经元死亡起十分重要的作用。 目的:脑血管痉挛(CVS)的主要危害是脑组织的缺血性、缺氧性损伤,随着临床及实验研究的不断深入,临床治疗不再局限于血管直径的缩小,脑血流量的下降等客观症像,而是试图从蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)造成脑损伤的机制入手,找出相应的治疗方法,本实验通过动态观察海马组织内bcl-2和baxmRNA的表达变化,以期为临床上有效防治蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)引起的脑损伤提供思路和依据。 材料与方法:采用新西兰兔进行研究。(1)动物随机分为正常对照组(6只),SAH组(24只),假手术组(24只),其中SAH组和假手术组在0d、1d、3d、7d时相点各6只。(2)采用枕大池双注血法制备兔SAH后CVS模型;两次注血间隔48小时;对照组枕大池注射生理盐水2.5ml,48h后再次注射2.5ml生理盐水;SAH组:枕大池注射自体动脉血2.5ml,48小时后再次注 第四军医大学硕士学位论文射2.sml目体动脉血。(3)对照组实验当日行脑血管造影后即处死,灌注,快速取海马,异硫氰酸弧法提取总NA;余实验物实验分别在相应时间点行脑血管造影,同对照组处死,提取海马总RNA。(4)采用PCR技术,结合凝胶成像系统,对各时间点伙-2、baxITI------**xxA所得的阳性条带密度迸行测量(应用labworks坎件),测得的密度与相应的p·actln条带密度比值作为其mRNA的相对表达R,采lJ X’检验进行分析。 结果:l)正常对照组中脑血管造影显示基底动脉直径为 070士0.122mm;假手术组脑血管造影基底动脉直径在 cd:0石5士0二32mm;id:0.68士0141—一3d:O.70士0.12功*m:7d:067士0.136—m:SAH组cd:0斗7士0.072mrn 2 id:052士0.077mm【3d:0.45士0刀682 7d:0.42士0070mm;(二)假手术组各时间点内仇。2 TTluru*xA的表达保持相对恒定,与正常对照组相比无明显变化T>0.05)。在SAH组其表达呈下降趋势,id明显降低,3d降至最低,并持续至 7d,与正’带对照组及同时间点假手术组相比有显著差异;(3)正常对照组诲马组织内 bax 11lltrvA表达水平较低,SAH组 SAH产生后 id,ba XInRNXInRNA表达即明显升高p、:00引。3d时达最高,7d仍显著高于正常组织及同一时间点的假手术组(P。0.of)。各假手术组内海马组织中 baxTnRNA的表达与正常对照组相比也没有明显变化(Pto.05)。 结论:()本实验结果显示实验性兔双注血模型可较好的模拟人SAH后CVS;其发生血管痉挛的时间点与临床基本一致。(2)bclZ和 bax可能参与了SAH后CVS所造成的海马神经元损伤的过程。
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