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作为益生菌的重要成员,乳酸菌对于宿主的先天免疫系统和维持其机体的免疫稳态有着重要的作用。其主要是通过增强或恢复肠道稳态来发挥作用,有能作为粘膜免疫载体的潜能。研究乳酸菌黏附是微生物在宿主定植的第一步,只有黏附在宿主的肠道细胞上才能使微生物在宿主体内长期发挥作用。为了研究不同乳酸菌对宿主的黏附能力与提高免疫性能的联系,以及乳酸菌对宿主肠道粘膜免疫屏障和对宿主的免疫力提高的作用的可能机制,本研究利用斑马鱼为模型,研究芽孢乳酸菌09.712 (B.coagulans 09.712)和植物乳杆菌08.923 (L.plantarum 08.923)在体内的定植情况,并与商业菌株鼠李糖乳杆菌CGMCC 1.3724(L.rhamnosus CGMCC 1.3724)、嗜热链球菌CGMCC 1.2471 (S.thermophilus CGMCC 1.2471)、长双歧杆菌婴儿亚种CGMCC 1.2202(B.infantis CGMCC 1.2202)进行比较。比较其生物膜形成能力的强弱并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记菌株进行斑马鱼肠道黏附实验,普通平板培养法进行验证,从而筛选出出强黏附菌株。通过HE、PAS、甲苯胺蓝染色以及免疫组化组织切片等手段比较五种乳酸菌对斑马鱼肠道黏膜屏障的保护作用,最后通过RT-PCR技术分别在体内和体外对细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-10的表达情况进行检测,并通过攻毒实验研究乳酸菌对斑马鱼抵抗嗜水气单胞菌NJ-1的能力和对体外斑马鱼ZF-4细胞系凋亡的影响。主要研究结果如下：1、研究显示不同乳酸菌的黏附能力。芽孢乳酸菌09.712、植物乳杆菌08.923和鼠李糖乳杆菌CGMCC 1.3724生物膜的形成能力比较强。通过平板培养法和FITC标记法在斑马鱼肠道黏附的28d表明,芽孢乳酸菌09.712和植物乳杆菌08.923是强黏附菌株,而嗜热链球菌CGMCC 1.2471和长双歧杆菌婴儿亚种CGMCC 1.2202的黏附能力相对比较弱。2、采用动物组织染色法探讨五种乳酸菌对斑马鱼肠道黏膜屏障的保护作用。通过HE染色对斑马鱼后肠的形态学观察初步得出芽孢乳酸菌09.712和植物乳杆菌08.923对被嗜水气单胞菌NJ-1攻毒的斑马鱼肠道完整性保护最好,进而通过PAS染色反应得出芽孢乳酸菌09.712能刺激斑马鱼肠道黏液层分泌更多的中性黏多糖从而提高肠道的化学屏障。采用甲苯胺蓝染色肠道中的肥大细胞,显示芽孢乳酸菌09.712和植物乳杆菌08.923可以减少感染后肥大细胞的数目(p<0.001),有效减少斑马鱼的肠炎症状。免疫组织化学染色斑马鱼肠道中上皮内淋巴细胞,发现鼠李糖乳杆菌CGMCC 1.3724、植物乳杆菌08.923和芽孢乳酸菌09.712可以显著提高其数目(p<0.001),增强肠道免疫屏障从而发挥强保护作用。3、在体内,五种乳酸菌在斑马鱼被嗜水气单胞菌NJ-1攻毒前后均能调节斑马鱼肠道中细胞因子TNFa和IL-10的表达情况。其中,植物乳杆菌08.923和芽孢乳酸菌09.712在攻毒后能很明显的降低促炎性细胞因子IL-1p的mRNA表达量(p<0.01),提高抑炎性细胞因子IL-10的mRNA表达量(p<0.01),并且在攻毒后均能减小斑马鱼的死亡率(p<0.05),其中植物乳杆菌08.923和芽孢乳酸菌09.712保护性最强。在体外,五种乳酸菌分别与ZF-4共培养,芽孢乳酸菌09.712能提高NFκB、TNFα和IL-10的mRNA表达量,与其他组相比有显著性差异(p<0.01),而对于IL-1p的mRNA表达量五种乳酸菌处理组与对照组比较无显著性差异。