畜禽种质资源是维持生态安全、农业稳定的重要资源,它推动着经济的繁荣与社会的进步。重要的家养动物种质资源应该受到重视,并得到有效的保护。间充质干细胞可以在体外快速增殖并且可以向其他细胞分化。这些优点使得它们成为畜禽种质资源保存研究的新渠道。本实验以肉鸡真皮来源和鹅心脏来源的间充质干细胞为实验对象,在体外对细胞进行了分离培养、生物学特性研究和诱导分化研究,并得到以下结果:1.利用胶原酶Ⅰ和胰蛋白酶分离得到肉鸡真皮间充质干细胞(Dermal Mesenchymal Stem Cells,DMSCs),并在体外条件下培养31代,细胞形态主要为长梭形。RT-PCR鉴定结果显示,细胞表达CD73、CD29、CD44,和CD71基因。免疫组织化学方法检测结果显示肉鸡DMSCs阳性表达CD105、CD90、CD73和CD44表面标记物。通过流式细胞仪分析,CD29、CD44和CD73在肉鸡DMSCs中高表达。DMSCs的生长曲线为明显的“S"形,与细胞在体外增殖的通常规律基本吻合。DMSCs的群体倍增时间和克隆形成能力的结果表明细胞的增殖能力随着代次的升高而减弱。研究表明肉鸡DMSCs能够在一定的条件下被分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞,通过特异性染色和RT-PCR鉴定证明肉鸡DMSCs向这三种细胞成功分化。2.利用胶原酶II和胰蛋白酶分离得到鹅心脏间充质干细胞(Heart-derived Mesenchymal Stem Cells,HMSCs),并在体外培养21代,细胞形态特征呈现梭状。RT-PCR和免疫组化检测检测结果都显示细胞表达CD29,CD34,CD73,CD166和CD44等MSCs特异基因。通过流式细胞术分析,CD29,CD34,CD73,CD166和CD44在鹅HMSCs中高表达。HMSCs的生长曲线表明HMSCs经过短暂潜伏期,进入迅速增殖的对数期,而后进入稳定期和衰亡期,呈现出明显的“S"形,与细胞体外生长的基本规律吻合。群体倍增时间结果表明HMSCs的增殖能力随着代次的升高逐渐减弱。通过在培养基中加入适当的诱导因子对HMSCs进行体外诱导分化实验,通过特异性染色和RT-PCR等方法对实验结果进行检测。实验结果表明,HMSCs成功被分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞,说明鹅HMSCs可以向多个方向诱导。综上所述,本实验成功分离培养了肉鸡DMSCs和鹅HMSCs,并且对它们进行了生物学特性研究和诱导分化研究。结果显示,肉鸡DMSCs和鹅HMSCs均表现出MSCs特有的生物学特性。实验结果对畜禽种质资源保存具有重要的意义,并且为再生医学和组织工程学提供了实验依据。