肿瘤是危害人类健康的主要疾病之一，目前的治疗手段各有其不足，尚缺乏一种高效，副作用少的特异性抗肿瘤方法。大量实验证实，肿瘤血管形成是肿瘤持续生长所必需的，血管为肿瘤细胞提供氧气和营养物质，排除代谢产物。如果肿瘤结节直径超过1-2mm，还缺乏新生毛细血管和小血管生长，瘤组织将退化。因此，若能抑制肿瘤组织的血管生成，就能抑制实体瘤的生长，并限制其转移。Ang(Angiogenin／血管生成因子)就是肿瘤组织中一种重要的促血管形成因子，RI(Ribonuclease Inhibitor／核糖核酸酶抑制因子)是它的高效抑制剂，是一个很有潜力的抗血管生成药。而脐血干细胞是目前公认的基因导入的良好载体，它具有移植成功率高，增殖潜能强，移植物抗宿主病轻和免疫杀伤肿瘤细胞等优点，且脐血来源方便，容易采集。自从1989年成功的进行了世界上第1例脐血移植治疗Fanconi贫血以来，脐血干细胞基因转移越来越成为人们研究的热点。目前，脐血干细胞正以其无法比拟的优点广泛应用于肿瘤、遗传性疾病等多种疾病的基因治疗中。本实验以逆转录病毒为载体，将RI基因转染已分离纯化的人脐血干细胞中，并在其上高度表达，为下一步的干细胞移植治疗肿瘤打下基础(即：将携带RI基因的人脐血干细胞经筛选及体外培养扩增后，再输回肿瘤患者体内，通过抑制肿瘤组织的血管生成，来抑制实体瘤的生长，并限制其转移。)这种崭新的抗肿瘤疗法，国内外均未见报道。 目的：探讨RI基因在人脐血干细胞中的转染及表达情况。 方法：①用碱裂解法，提取pLNCX-ri；②用脂质体转染法，把RI基因导入包装细胞PA317中，并用G418筛选法检测是否有阳性细胞克隆出现；③以NIH3T3细胞为靶细胞，测病毒滴度，筛选出产毒高的细胞株；④用免疫磁珠分离人脐血干细胞，富集CD34~+细胞，并用流式细胞仪检测CD34~+细胞的含量；⑤以逆转录病毒为载体，将pLNCX-ri转染CD34~+细胞，然后用G418筛选法检测基因转染效率并选出阳性细胞克隆；⑥PCR方法鉴定有无pLNCX-ri整合到染色体上；⑦用westem七lot检测转染后班基因的表达量。 结果:①经琼脂糖凝胶电泳法检测，所提取的pLNCX一ri纯度较高:②G418在500 pg/m1的浓度下，RI基因转染PA317细胞后有阳性细胞克隆出现;③用NIH3T3细胞检测出的病毒滴度为2.5 x IOOCFU/ml;④用流式细胞仪检测出的CD34+细胞的含量为%.15%;⑤G418在500协g/m1的浓度下，转染CD34+细胞的效率达17.8%，且有阳性细胞克隆出现;⑥经PCR方法鉴定，pLNCx一ri已整合到染色体上;⑦经Westem一lot检测，转染后班基因有阳性表达。 结论:班基因能够导入人脐血CD34+细胞中，并能在其上高度表达。