论文部分内容阅读
负性共刺激分子B7-H4是2003年最新发现的B7家族的新成员。人B7-H4mRNA在正常组织中普遍表达，而B7-H4蛋白在正常组织中基本不表达。然而近年研究显示，在多种肿瘤细胞如卵巢癌，胰腺癌，胃癌，肾癌细胞以及肿瘤浸润免疫细胞上发现有B7-H4的异常表达，提示正常组织能够在转录后水平对B7-H4的表达进行严格调控，而在肿瘤环境中这种调控机制受到抑制或发生改变。B7-H4能够抑制CD3+T细胞浸润，并诱导活化CTL凋亡，削弱机体的抗肿瘤免疫应答。同时，B7-H4分子还能保护肿瘤细胞逃避免疫监视，为肿瘤免疫逃逸提供必要条件。临床研究表明，B7-H4在肿瘤组织中表达与患者临床病理参数密切相关，且高表达B7-H4患者往往预后较差，生存率降低。随着对B7-H4的深入研究，其作为负性共刺激分子在肿瘤免疫中的作用越来越受到关注。本研究通过检测肠癌标本B7-H4的表达以及T细胞、TAM的浸润，分析肠癌组织B7-H4表达的临床意义，并结合体外相关实验，进一步探讨B7-H4在肠癌细胞及浸润淋巴细胞表达的意义和作用。第一部分负性共刺激分子B7-H4在结直肠癌和微环境中的表达及临床意义【目的】分析人结直肠癌组织中肿瘤细胞及肿瘤浸润淋巴细胞（Tumor-infiltrating lymphocyte,TIL）负性共刺激分子B7-H4的表达以及巨噬细胞、T淋巴细胞及其亚群在肿瘤微环境中的浸润，进而探讨其相关临床意义。【方法】采用免疫组化SP法检测98例人结直肠癌组织中肿瘤细胞及浸润淋巴细胞上B7-H4的表达以及巨噬细胞、T细胞及其亚群的浸润，统计学分析B7-H4的表达与患者临床病理参数、预后、肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-associatedmacrophage, TAM）以及CD3+、CD8+T细胞浸润程度的相关性。【结果】结直肠癌组织中异常表达B7-H4分子，而正常组织中基本不表达，并且在肿瘤细胞及浸润淋巴细胞上均检测到B7-H4的表达。统计学分析表明，浸润淋巴细胞B7-H4的表达水平与患者年龄、有无淋巴结转移、是否为粘液腺癌有关（P<0.5），与患者总体生存率呈负相关（P<0.05），且B7-H4高表达组织较B7-H4低表达组织CD3+T细胞高度浸润例数显著增加（P<0.5）；肠癌细胞中B7-H4的表达与患者肿瘤分期、淋巴结转移、有无远处转移以及Duke’s分期有关（P<0.5）。【结论】人结直肠癌患者的肠癌细胞及浸润淋巴细胞均异常表达B7-H4分子，CD3+T细胞的浸润程度与浸润淋巴细胞B7-H4的表达呈显著相关而与肿瘤细胞上B7-H4的表达无关。而肿瘤细胞表达B7-H4与肿瘤分期、淋巴结转移、有无远处转移以及Duke’s分期相关。上述结果提示肿瘤细胞表达B7-H4与浸润淋巴细胞表达B7-H4可能分别以不同机制参与了肿瘤的发生和进展，且对进一步分析肿瘤组织中B7-H4在不同细胞表达的生物学和临床意义具有重要的价值。第二部分B7-H4分子在肿瘤细胞及单核巨噬细胞表达作用的研究【目的】检测表达B7-H4的单核巨噬细胞株U937与活化T细胞共培养后对T细胞增殖的影响以及表达B7-H4的肿瘤细胞在抗肿瘤药物作用下的增殖凋亡情况，分析B7-H4在肿瘤细胞及TAM上表达的可能作用。【方法】从健康人外周血分离PBMC，免疫磁珠分选其中的T细胞，然后以单核巨噬细胞株U937与活化T细胞共培养检测T细胞的增殖凋亡情况；以抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶干预293/B7-H4细胞株后检测293细胞的增殖凋亡情况。【结果】表达B7-H4的U937能抑制T细胞活化增殖并诱导其凋亡；表达B7-H4的293细胞能抵抗或部分抵抗抗肿瘤药物的增殖抑制及诱导凋亡。【结论】表达B7-H4的U937能抑制T细胞活化增殖并诱导其凋亡，提示B7-H4在单核巨噬细胞上的表达可能通过抑制T细胞的增殖并诱导其凋亡从而发挥负性调控作用；表达B7-H4的293细胞能抵抗或部分抵抗抗肿瘤药物的增殖抑制及诱导凋亡，提示B7-H4在肿瘤细胞上的表达可能通过增强自身免疫耐受从而逃脱免疫监视，介导肿瘤逃逸。综上所述，本研究结果表明，负性共刺激分子B7-H4在肠癌肿瘤细胞及浸润淋巴细胞上均异常表达，并可能通过不同的作用机制参与肿瘤的发生与发展，负性调控机体抗肿瘤免疫应答，介导肿瘤逃逸。分别对肿瘤细胞及浸润免疫细胞上B7-H4表达的研究，为深入探讨B7-H4在肿瘤微环境中表达的意义及作用机制提供新的依据。