黄芪注射液通过诱导自噬影响人宫颈癌Hela细胞的增殖

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宫颈癌(Cervical Cancer,CC)是常见的妇科肿瘤,由人类乳头瘤病毒(HPV)感染,目前检测宫颈癌的筛查方法包括基于细胞学的巴氏涂片和通过HPV检测人乳头瘤病毒(HPV)。虽然化疗是肿瘤的有效治疗手段,但其副作用较大,所以越来越多研究者将目光转向中药的研究。已有临床研究表明,中药(姜黄素、苦参、贞芪扶正颗粒等)可以通过诱导细胞凋亡、激活DNA修复系统、阻滞细胞周期、抑制血管生成等途径发挥抗癌作用。黄芪,又名绵芪,在我国是传统的益气中药,具有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用,近几年研究发现黄芪也具有抗肿瘤的作用,黄芪注射液的主要成分是黄芪。然而黄芪注射液抑制Hela细胞增殖的报道较少,其机制尚未阐明。本研究通过不同浓度的黄芪注射液作用于Hela细胞,采用多种实验方法探究黄芪注射液对人宫颈癌Hela细胞的增殖、生物学行为、凋亡等的影响以及可能的作用机制。通过MTT法检测不同浓度的黄芪注射液作用于人宫颈癌Hela细胞24 h后对Hela细胞增殖的影响,并且根据黄芪注射液作用于Hela细胞后的抑制率筛选出低中高三个实验组进行以下的实验;流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测对照组、低中高实验组对Hela细胞凋亡率的影响;扫描电子显微镜(Scanning Electron Microscope,SEM)观察每组Hela细胞表面微绒毛、伪足等结构的变化;Transwell实验观察对照组、低中高实验组对Hela细胞垂直迁移能力和侵袭能力的影响;Western blot技术检测对照组、低中高实验组Hela细胞中AKT、P-AKT、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62等蛋白表达。结果发现,不同浓度的黄芪注射液作用于Hela细胞24 h后,随着黄芪注射液浓度越来越高,Hela细胞的抑制率逐渐增高,与之呈正相,根据抑制率筛选出以下三个浓度为实验组:低浓度实验组(800mg?m L-1)、中浓度实验组(1100 mg?m L-1)、高浓度实验组(1400 mg?m L-1),随着药物浓度逐渐增高,倒置显微镜下观察到Hela细胞间隙变大,细胞变圆;SEM观察到随着药物浓度的增加,Hela细胞结构的破坏越来越严重;抑制率依次为(16±1.56)%,(37±2.01)%、(58±3.03)%;凋亡率分别为(6.80±0.13)%,(9.70±0.13)%,(10.60±0.13)%,(23.9±0.13)%;穿膜细胞个数依次为:128±4、90±2、61±3、29±3;穿胶细胞个数分别为:112±5、79±4、51±4、14±4;实验组与对照组相比差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组、低中高实验组的AKT蛋白表达量:0.81±0.02、0.85±0.03、0.83±0.02、0.83±0.03,实验组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);P-AKT蛋白表达量依次为:0.83±0.02、0.71±0.01、0.50±0.01、0.32±0.01;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ相对表达量分别为0.10±0.01,0.12±0.01,0.17±0.01,0.19±0.00;这四组的P62的相对表达量分别为1.05±0.09,0.77±0.04,0.58±0.02,0.37±0.01;实验组与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。研究结果表明,黄芪注射液诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡,抑制Hela细胞的增殖、迁移能力和侵袭能力,促进凋亡,可能是与黄芪注射液诱导Hela细胞发生自噬,P62、P-AKT蛋白表达降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达量增加这一机制有关。
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