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目的对在保健食品中发现的新型磷酸二酯酶5型（PDE5型）抑制剂进行高效液相、质谱和核磁共振氢谱技术分析和确证,建立相关检验标准,为今后在食品药品监督抽检工作中提供有效支撑。建立基于表面增强拉曼光谱技术的21种PDE5型抑制剂指纹图谱数据库,实现PDE5型抑制剂的快速筛查。方法1.初筛采用现行标准方法,检测180批次市场抽检样品,发现两种未知化合物,经制备液相提取纯化,核磁氢谱解析化合物结构,并经高分辨质谱确认,最终确定化合物结构。2.采用高效液相色谱-串联质谱法,以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,柱温35℃,流速:300μL·min-1,进样量:2μL,电喷雾离子源,扫描方式:正离子扫描,多反应离子监测,建立去甲基卡巴地那非、丙氧基艾地那非、2-羟丙基去甲基他达拉非和N-乙基他达拉非四种化合物的检验标准,对其进行方法学研究。3.利用高效液相色谱法以乙腈-0.1%三氟乙酸水为流动相,柱温35℃,检测波长:230nm,流速:1.0mL·min-1,进样量:10μL,建立去甲基他达拉非、2-羟丙基去甲基他达拉非、2-羟乙基去甲基他达拉非和他达拉非杂质37四种化合物的检验标准,进行方法学研究;并采用液质色谱技术,以0.02moL·L-1乙酸铵溶液（0.1%乙酸）-乙腈-甲醇（45:25:30）为流动相,流速:0.2mL·min-1;柱温:35℃;电喷雾电离源（ESI+）,正离子检测,采取一级全扫描及二级、三级扫描,质量范围50-600,建立上述四种化合物定性确认方法。4.利用表面增强拉曼光谱技术,以去甲基卡巴地那非为研究对象,通过正交实验,确定积分时间、积分次数、平滑次数、功率四种仪器参数及增强试剂的浓度比例,并应用此方法建立西地那非类、他达拉非类及伐地那非类21种非法添加物的表面增强拉曼光谱指纹数据库。结果1.在保健食品市场抽检样品中发现的新化合物为去甲基卡巴地那非和他达拉非杂质37;去甲基卡巴地那非分子式为C23H30O3N6,化学名为5-（5-（4-甲基哌嗪-1-羰基）-2-乙氧苯基）-1-甲基-3-丙基-1H-吡唑[4,3-d]嘧啶-7（6H）-酮;他达拉非杂质37分子式为C24H23O5N3,化学名为6-（苯并[d][1,3]二恶茂-5-基）-2-（3-羟丙基）-2,3,6,7,12,12a-六氢化吡嗪并[1’2’:1,6]吡啶并[3,4-b]吲哚-1,4-二酮。2.采用高效液相液质联用法,并进行方法学考察,去甲基卡巴地那非、丙氧基艾地那非、羟丙基去甲基他达拉非和N-乙基他达拉非在相应浓度范围内线性关系均大于0.99,检出限均在0.411141.3520 ng·mL-1之间,加标回收率为71.2%109.7%,RSD在0.6%9.1%之间。表明该方法稳定可行,重复性高、灵敏度高。3.采用高效液相法定量测定,并进行方法学考察,去甲基他达拉非、2-羟丙基去甲基他达拉非、2-羟乙基去甲基他达拉非和他达拉非杂质37在相应浓度范围内线性关系均大于0.99,检出限均在1.24375.912 ng·mL-1之间,加标回收率为96.62%104.76%,RSD均在0.1%3.9%之间,表明该方法易于操作,稳定可行。采用液质联用法定性检测,确定了四种他达拉非类化合物二级和三级碎片离子。4.利用表面增强拉曼光谱技术,通过正交实验,确定积分时间为30s,积分次数3次,平滑次数3次,功率300W,增强试剂金胶OTR202试剂与OTR103试剂比例为600:100,并运用此方法建立了21种PDE5抑制剂表面增强拉曼光谱指纹图谱数据库,确定以上21种PDE5抑制剂检出限为15μg·mL-1,此方法简便易操作,适用于现场快速检测。结论经分析和确认在保健食品中发现的新型非法添加物分别为去甲基卡巴地那非和他达拉非杂质37,以上两种化合物均为国内首次报道,应引起检验工作者的关注。建立的去甲基卡巴地那非等四种化合物液质联用检测方法,适用于不同复杂基质下的快速、准确定量检测;建立的他达拉非杂质37等四种他达拉非衍生物检验方法,可适用于不同复杂基质下定性和定量检测;建立的PDE5抑制剂表面增强拉曼光谱指纹数据库,适用于非法添加PDE5抑制剂的快速筛查和准确定性。