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目的探讨ADAM9特异性SiRNA靶向沉默ADAM9基因表达及对肾透明细胞癌786-0细胞侵袭力的影响。方法1.实验准备：设计合成三条靶向ADAM9基因的小干扰RNA (Small interfering RNA, siRNA)(分别为ADAM9-SiRNA-1018、ADAM9-SiRNA-1843、 ADAM9-SiRNA-2366),和一条阴性对照SiRNA(negative control SiRNA, NC-SiRNA)。复苏传代培养肾透明细胞癌786-0细胞。通过预实验确定最佳转染条件,筛选出最佳沉默作用的ADAM9特异性SiRNA。2.实验分组：实验分为未转染组(正常培养的786-0细胞)、LipofectamineTM2000转染组、阴性对照SiRNA (negative control SiRNA, NC-SiRNA)转染组及ADAM9特异性SiRNA转染组。分别于转染后24h、48h、72h后检测相应指标变化。3.检测指标及方法1)采用反转录酶链聚合反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)的方法检测肾透明细胞癌786-0细胞中ADAM9mRNA的表达。结果用ImageJ软件进行灰度分析。肾透明细胞癌786-0细胞中ADAM9mRNA的相对表达量用同组中ADAM9的灰度值与β-actin的灰度值的比值表示。2)免疫细胞化学方法检测肾透明细胞癌786-0细胞中ADAM9蛋白的表达。3)应用Western blot方法检测肾透明细胞癌786-0细胞中ADAM9蛋白的表达。ImageJ软件图片数据分析灰度值。ADAM9蛋白的相对表达量用同组中ADAM9的灰度值与β-actin的灰度值的比值表示。4) Transwell侵袭性小室检测细胞的迁移侵袭能力。用特定条件下的穿膜细胞数代表肾透明细胞癌786-0细胞的侵袭能力。4.统计学处理：数据采用SPSS17.0统计软件包,组间差异用单因素方差分析进行数据处理。确定α=0.05为检验水准。结果肾透明细胞癌786-0细胞中ADAM9蛋白及mRNA均呈高表达。其中ADAM9SiRNA-2366转染组,在转染肾透明细胞癌786-0细胞24h、48h、72h后,不论是在mRNA水平还是蛋白水平ADAM9基因的表达均被有效沉默,以转染后48h的沉默效果最好。转染48h后ADAM9特异性SiRNA转染组与正常组比较,12h穿膜细胞数明显减少,两组间差异具有统计学意义(P=0.008)。与正常培养786-0细胞组比较,单纯脂质体转染组、阴性序列转染组之间穿膜细胞数的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论ADAM9特异性SiRNA能够有效沉默肾透明细胞癌786-0细胞中ADAM9基因的表达,并降低其体外侵袭能力。