中药作为中医防病治病的物质载体,其质量直接决定着临床用药的安全性和有效性。因此,中药质量控制一直是中药研究的热点和难点,也是中药现代化的前题和重要基础。中药质量控制的关键是质控成分的选择,由于中药临床应用较广、涉及活性成分复杂,并且含量差异很大,因此长期以来,选择适合的质控成分及其研究策略一直是中药质量控制研究的核心。中药淫羊藿源于小檗科淫羊藿属(Epimedium L.)多种植物的干燥叶。2015版《中国药典》淫羊藿项下共收载了 4个品种,分别为淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim.)、箭叶淫羊藿(Epimedium sagittatum Maxim.)、柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maxim.)和朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai.)。淫羊蕾具有补肾壮阳,强健筋骨,祛风湿之功效,主要用于治疗肾阳虚衰,阳瘘遗精,筋骨瘘软,风湿痹痛,麻木拘挛等疾病,其质控指标成分为淫羊藿苷及总黄酮。本研究主要采用高分辨质谱的方法(UPLC-Q/TOF-MS)对淫羊藿本身的化学成分、体内吸收成分(血液、尿液、粪便)进行系统分析,同时基于离体肠外翻模型对其中主要成分的吸收过程和吸收特征进行研究,并采用网络药理学研究方法对体内吸收成分进行活性预测;在此基础上,筛选出主要化学成分作为质控指标,建立淫羊藿多成分质量控制方法,对收集的34个批次淫羊藿药材(涉及5个品种)进行质量评价,其结果为淫羊蕾药效物质基础的筛选及建立活性导向下的质量控制方法提供参考。具体研究内容分为以下几个方面:(1)基于高分辨质谱的淫羊藿药材化学成分、体内吸收成分分析及其网络药理学活性预测。采用超高压液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q/TOF-MS),对淫羊藿药材本身化学成分进行分析。实验中通过进行对照品的精确分子量离子比对(△ppm<10)及碎片离子的分析,对含异戊烯基结构的黄酮类化合物的裂解规律进行了总结;在此基础上从淫羊藿药材提取物中共确认鉴定出了 52种化学成分,其中主要为黄酮类化合物,淫羊藿经口服吸收后在大鼠血浆中检测出7个原型成分、尿液中检测出13个原型成分和粪便中检测到27个原型成分;选择淫羊藿血液和尿液中的总共13个成分,基于结构相似性,从DrugBank数据库中提取其已知的靶标信息,并对候选靶标及其相互作用分子的通路进行富集分析,结果得到35条信号通路(P<0.02),涉及炎症、骨质疏松、癌症等生物学功能,并采用网络图的方式建立了淫羊藿体内吸收成分-靶标-通路的相互关系,从计算的角度揭示了中药多成分、多靶标的作用特点,为进一步实验验证和活性成分筛选提供参考。(2)肠外翻囊法研究淫羊藿肠吸收成分及其吸收特征。在淫羊藿体内吸收成分的研究基础上,从中筛选了 5种主要的黄酮类成分(朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷,淫羊藿次苷Ⅱ)为代表,进行基于肠外翻模型的吸收特征研究。通过建立肠吸收液中5种成分含量测定的方法学,对5种主要成分在小肠不同部位的累积吸收量(Q)、肠吸收动力学、以及肠吸收液与提取物中5种成分的比例变化进行了研究。结果发现,5种黄酮类成分在不同肠段的吸收选择性基本一致,随着给药浓度的增加,5种成分在小肠中的最大吸收部位逐步后移,从空肠前段、中段,后移到回肠段;各成分的累积吸收量(Q)与时间的回归相关系数(R2)均大于0.9,说明3个给药浓度下,淫羊藿提取物中5个成分的体外肠吸收均为线性吸收,并且吸收速率常数(Ka)随着淫羊藿提取液浓度的增加而增大,表明它们的肠吸收为被动吸收;淫羊藿提取物经小肠系膜吸收后,所含5个黄酮类成分的比例发生改变,并且受到给药浓度的影响,可能是由肠细胞内酶的水解作用及各化合物本身吸收特征不同导致。(3)基于淫羊藿多成分定量及指纹图谱的质量控制研究。基于淫羊藿体内吸收成分,从中筛选了 6种主要成分,分别为朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊蕾次苷Ⅱ,采用高效液相色谱法(HPLC)建立淫羊藿药材多成分含量测定及指纹图谱分析的质量控制方法。实验中对样品提取方法,溶剂种类、溶剂用量、提取时间等因素进行了详细考察,并对色谱柱、流动相等色谱条件进行了优化,精密度、稳定性、准确度、重复性等方法学指标均符合药典规定。在此基础上对收集的34批次淫羊藿药材(涉及5个品种)进行了含量测定和指纹图谱相似度分析。含量测定结果还表明,淫羊藿苷不是所有样本中含量最高的黄酮类成分,在所检测的34批样本中有26批样本中朝藿定C的含量高于淫羊藿苷。从均值上看,淫羊藿、柔毛淫羊藿、黔岭淫羊藿、粗毛淫羊藿中含量最高的成分均为朝藿定C,朝鲜淫羊藿含量最高成分为朝藿定B。在个别淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鲜淫羊藿样本中含量最高的为淫羊藿苷。此外,淫羊藿苷、朝藿定A、B、C在5个品种皆能检测得到,而淫羊藿次苷Ⅰ只在少数样本中检测到,淫羊藿次苷Ⅱ虽然在大多数样本中可以检测到,但其含量相比于朝藿定A、B、C和淫羊藿苷显著降低。指纹图谱相似度分析结果表明,淫羊藿药材5个不同品种平均指纹图谱间相似度在0.569～0.917,其中柔毛淫羊藿与黔岭淫羊藿种间的差异最大,相似度为0.569,药典收载的3个品种淫羊藿、朝鲜淫羊藿、柔毛淫羊蕾种间相似度在0.665～0.910,以上结果说明不同品种淫羊藿药材质量差异较大。