【摘 要】
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目的:通过一系列体外实验探究组蛋白去乙酰化酶4-N末端对软骨细胞凋亡的影响以及其机制。方法:1.提取SD大鼠肋软骨细胞,利用免疫荧光染色鉴定提取的大鼠软骨细胞。2.在软骨细胞中分别转染HDAC4-N端、HDAC4-C端、HDAC4全长、空载体GFP质粒,通过活细胞工作站实时动态观察细胞的生长状态及凋亡情况。3.利用流式细胞仪检测转染后各组凋亡情况。4.利用RT-PCR检测转染后的各组软骨细胞的Ca
【基金项目】
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国家自然科学基金“组蛋白去乙酰化酶 4 在骨关节炎早期关节软骨退变中的作用及机制研究（编号:8177091074）”；
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目的:通过一系列体外实验探究组蛋白去乙酰化酶4-N末端对软骨细胞凋亡的影响以及其机制。方法:1.提取SD大鼠肋软骨细胞,利用免疫荧光染色鉴定提取的大鼠软骨细胞。2.在软骨细胞中分别转染HDAC4-N端、HDAC4-C端、HDAC4全长、空载体GFP质粒,通过活细胞工作站实时动态观察细胞的生长状态及凋亡情况。3.利用流式细胞仪检测转染后各组凋亡情况。4.利用RT-PCR检测转染后的各组软骨细胞的Caspase-3、Caspase-12的m RNA表达差异。5.利用Western-blot检测转染后的各组软骨细胞的Caspase-3、Caspase-12的蛋白表达差异。结果:1.在活细胞工作站下观察各组软骨细胞,发现转染HDAC4-N端后的软骨细胞发生了明显凋亡。HDAC4-C、HDAC4全长、空载体质粒组未发生明显凋亡。2.利用流式细胞仪检测各组软骨细胞的凋亡情况,发现转染HDAC4-N末端后的软骨细胞凋亡率高于空白对照组,结果有统计学意义（P<0.05）。其余各组凋亡率与空白对照组差异没有统计学意义（P>0.05）。3.RT-PCR结果显示:HDAC4-N端组与NC组（空白对照组）相比Caspase-3,Caspase-12表达增加,差异有统计学意义（P<0.05）。HDAC4全长组、DHAC4-C端组与NC组相比Caspase-3、Caspase-12表达差异没有统计学意义（P>0.05）。4.Western-blot结果显示:HDAC4-N端组Caspase-3蛋白表达高于NC组（正常对照组）,其结果有统计学意义（P<0.05）,HDAC4-C端、DHAC4全长组的Caspase-3蛋白表达与NC组相比结果无统计学意义（P>0.05）。HDAC4-N组Caspase-12蛋白表达高于NC组,其结果有统计学意义（P<0.05）。HDAC4-C端、HDAC4全长组的Caspase-12蛋白表达与NC组相比结果无统计学意义（P>0.05）。结论:HDAC4-N末端可以诱导软骨细胞发生凋亡,并且其诱导凋亡的机制可能与上调促凋亡因子Caspase-3和Caspase-12有关。而Caspase-12是内质网应激凋亡通路（ERS）的特异性蛋白,在ERS中Caspase-12可以从内质网进入到细胞液中激活Caspase-3,从而诱导凋亡。所以,HDAC4-N端可能通过ERS通路诱导软骨细胞发生凋亡。
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