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P-糖蛋白的高表达是导致人膀胱肿瘤细胞多药耐药的主要原因。肿瘤细胞多药耐药的靶向治疗的关键，是寻找特异性的靶向载体。与抗体或抗体片段相比，肽类小分子载体分子较小，组织穿透性好，在体内不易诱发免疫应答，而且半衰期较短，能被及时清除。因此，P-糖蛋白特异性结合肽筛选，是进一步进行人膀胱癌多药耐药靶向逆转研究的前提，必将对肿瘤细胞多药耐药的基础研究和临床应用研究产生积极的推动作用。 为分析研究P-糖蛋白的结构和功能关系，了解其表面特性，以选择亲水性、抗原性较高的P-糖蛋白胞外段蛋白在原核系统中进行可溶性表达，本课题首先在方法学比较的基础上，联合运用多种方法对P-糖蛋白的二级结构和表面特性，如理化性质、亲水性、免疫原性等方面进行分析和预测。结果发现：P-糖蛋白存在有多个潜在的抗原表位位点；结合跨膜区和亲水性预测结果，选择含有单抗MRK-16抗原识别表位的第Ⅰ胞外段82aa-115aa作为靶蛋白，用于免疫动物或筛选文库，有可能获得其识别抗体或特异性结合肽。设计了PCR引物，以含有人mdrlcDNA全长序列的pHAMDRl／A质粒为模板，应用PCR扩增该胞外段DNA，克隆入pGEX-2T融合表达载体，转化DH5α菌后，进行诱导表达，并对表达条件进行优化，获得了高效可溶性表达的GST-Pgp融合蛋白，分子量约30KD，并对表达的融合蛋白进行了纯化和鉴定。进一步利用表达获得的GST-Pgp融合蛋白筛选噬菌体随机12肽库；通过4轮筛选，获得了P-糖蛋白特异性结合肽，并对噬菌体克隆进行插入肽ssDNA序列的测定和分析，获得了插入肽的氨基酸序列：NDGLLFTWQPSP。并利用所获得的阳性噬菌体克隆，在耐药和敏感的人膀胱癌细胞中进行免疫细胞化学染色的初步研究，结果发现：所获得的阳性噬菌体克隆仅与耐药的人膀胱癌细胞结合，表明这种结合具有一定的亲和力博士学位论文：P．糖蛋白胞外段的融合表达及其结合肽的筛选研究和肿瘤耐药特异性。 本研究对卜糖蛋白的二级结构和表面特性的分析结果，为进一步研究卜糖蛋白的结构和功能、构建卜糖蛋白突变体和选择表达新型卜糖蛋白分子奠定了基础。本研究所获得的“－nPP融合蛋白以及所建立的制备方法为肿瘤细胞多药耐药的研究提供了有利的条件和可供借鉴的方法。所获得的卜糖蛋白特异性结合肽，为肿瘤细胞多药耐药的诊断和靶向治疗研究奠定了实验基础。