论文部分内容阅读
目的:肾是机体最重要的排泄器官。目前,关于肾组织结构特点及其功能意义的研究颇多,但对肾内淋巴管分布和结构特点,相关研究报道较少。本课题拟通过HE染色和5-核苷酸酶和碱性磷酸酶组织化学双重染色,肾组织超薄切片的重金属染色,对大鼠肾组织结构进行光镜和透射电镜观察,探讨肾组织结构特点,揭示肾脉管系统特别淋巴管的构筑特点,为尿液形成和蛋白质等物质重吸收机制的分析及肾病的临床治疗,提供形态学方面的依据。
方法:选取健康成年SD大鼠8只,麻醉后即时取出肾组织,做冷冻切片,进行苏木精-伊红(HE)染色,对相邻切片进行5-核苷酸酶和碱性磷酸酶(5-Nase-ALPase)酶组织化学双重染色,常规光镜观察肾组织的细微结构,重点观察其脉管系统的构筑特点。取新鲜大鼠肾组织,制备透射电镜(TEM)样品,应用TEM观察肾实质和间质的超微结构,辨别肾组织各种细胞的形态,区分毛细血管和毛细淋巴管,比较两者的数量及位置关系。
结果:
1、HE染色切片的光镜观察
大鼠肾表面为一薄层结缔组织被膜,皮质和髓质分界明显,呈似一个肾锥体,肾柱不明显。肾小球和肾小管清晰可辨,在被囊下和肾实质的间质内,存在丰富的脉管样管道和神经纤维。肾小管断面较多,各部基膜厚度不一。近端和远端小管腔面有刷状缘,细段无刷状缘。集合小管上皮细胞为单层立方或柱状、高柱状。皮质间质较少,髓质深部间质较多。皮质和髓质交界线,可见到弓形血管,但数量较少。在肾小体和肾小管周围的间质内,可见到管腔大小不一的淋巴管。
2、酶组织化学双染切片的光镜观察
在同一张切片上,可同时显示血管和淋巴管的分布和结构特点;血管常为圆形或卵圆形,管腔内常见红细胞,管壁呈现ALPase蓝色着色;淋巴管较粗大而不规则,腔内可见均质样物质,管壁呈现5’-Nase棕褐色着色;肾小管普遍呈ALPase强阳性蓝色深染现象。肾被膜下可见到多个着色不一的管腔。在肾间质结缔组织较宽阔的部位,可见管腔较大的血管,管壁较厚,但未见淋巴管伴行。在实质内的肾小管之间,可见到多个呈蓝色反应的血管,管腔与近端小管相似,但管壁较薄。
肾实质内的毛细血管球分布稀疏,呈弱蓝色反应;肾小囊腔不明显,壁层均呈褐色。在远端肾小管周围,有丰富的呈现蓝色反应的毛细血管;在肾小球和近端小管周围,多见疑似毛细淋巴管的褐色小管,管腔大小与远端肾小管周围的毛细血管相似;还可见到入球和出球微动脉,因显色与肾小管相似,故不易区分。在肾髓质深层,可见褐色腔管,腔大壁薄,还有大量呈现弱蓝色的毛细血管,未见管腔较大的血管;还常见到深褐色碎片组织。
3、超薄组织切片的透射电镜观察
构成肾小球的毛细血管和间质内的毛细血管,均为有窗孔(50nm)的有孔型;在肾小管之间的间质内,存在开放(1000nm)连接型毛细淋巴管。
肾小囊壁层为扁平上皮,表面有少量微绒毛。细胞器稀疏,线粒体、高尔基复合体及一些小泡不发达,基膜分层。足细胞胞体较大,伸出的三级突起,紧贴于血管球的基膜。细胞骨架发达。裂隙膜和血管球基膜之间有间隙,有矩形孔。滤过膜分内、外疏层和致密层。近端和远端小管腔面微绒毛密集细长。细段由单层扁平上皮组成,无刷状缘。
肾皮质内间质较少,髓质内间质较多。一般动脉内皮较厚,为连续型,静脉管腔不规则,为有孔型。淋巴管管壁菲薄,管腔大小不一,管腔内有瓣膜状结构突入;毛细淋巴管由单层内皮围成,基膜不完整的。
结论:1.肾作为机体重要的排泄器官,不同的组织结构特点,与尿液形成过程中各自的功能密切相关。2.大鼠肾被囊下和间质内存在丰富的淋巴管,鉴于其分布、结构和功能特点,提示其在尿蛋白等大分子物质的重吸收和转运中,可能发挥重要作用。肾淋巴回流异常与某些肾功能障碍可能存在密切关系,值得进一步深入研究。3.因为肾小管与血管同样含有碱性磷酸酶,呈现极强的显色反应,故在区分两者时,不宜采用5-Nase-ALPase酶组织化学双重染色法。