深绿木霉REMI突变菌株H6对黄瓜枯萎病的生物防治

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 9次 | 上传用户:xiezuoyaoxiezuoyao
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本研究选用深绿木霉菌作为出发菌株,首先通过REMI技术(限制性内切酶介导基因整合技术)来构建深绿木霉菌T23菌株的突变体库,以250μg/mL的潮霉素作为筛选标记,共获得了200个抗潮霉素稳定的转化子。对所获得的转化子进行抗性筛选和生物防治实验,最终确定H6菌株为实验工程菌株,并系统探讨了H6菌株的液体和固体发酵条件,主要结果如下:1.固体发酵条件的种子液配方:马铃薯200g/L,葡萄糖20g/L,MgSO4·7H2O 0.5g/L,FeSO4·7H2O 0.0075g/L,MnSO40.0025g/L,ZnSO4 0.002g/L,KH2PO4 3.83g/L,NaNO3 1.42g/L,(NH42SO4 1.1g/L,CaCl2 1g/L。固体发酵配料及配置比例:麦麸:腐殖酸钠∶玉米渣∶稻壳∶稻草粉=15∶0.75∶3∶10∶10,固料比水为1∶0.5(w/v)。固体发酵条件:培养料铺垫厚度为7cm,种子液接种量为20%,发酵温度为恒温28℃,通气量为0.5~0.8 wm,每12h发酵罐内翻动培养料1次即可,固体发酵产物中分生孢子含量最高可达1.64×1011个/g,固体发酵产物经40℃烘箱干燥后可直接使用。2.液体发酵培养基配方:马铃薯200g/L,葡萄糖20g/L,KH2PO4 1g/L,MgSO4·7H2O 0.5g/L,FeSO4·7H2O 0.01g/L。液体发酵条件:培养基pH调至4,孢悬液的接种量为0.2%(v/v),瓶装量为100mL/250mL三角瓶,28℃条件下发酵3d,液体发酵产物中厚垣孢子产量可达1.1×108个/g,高于目前国内外报道的生物量。3.生物农药的配置方法:液体发酵产物按重量每20mL与70g载体吸附(吸附剂载体为5:1的硅藻土和轻质碳酸钙混剂),再加入矿质营养元素10g(KH2PO4 7g、MgSO4 1g、CaSO4 1g、(NH46MO7O24·4H2O 0.5 g、H3BO3 0.2g、MnSO40.1g、FeSO40.1g、ZnSO4 0.1g),混合均匀,干燥好制成颗粒剂(生物农药)。4.生物农药与H6菌株固体发酵产物对黄瓜枯萎病的防治效果分别为95%~100%和95.8%左右(使用剂量为8%),可见生物农药的生防效果更为突出,且厚垣孢子制剂的货架期长,可更好的满足生产和推广的需要。5.通过H6突变菌株生防菌剂的盆栽及田间的菌剂施用剂量的筛选,得知最佳的使用比例为8%(与土壤质量比)。与此同时,本实验通过对黄瓜苗期一定时间内株高和鲜重的测量,以及对其根际土壤的盐度及酸度的测量,发现H6的固体发酵产物除了具有良好的生防能力外,还具有有效改良土壤的盐碱质地和促进黄瓜生长的作用,且使土壤酸度下降的趋势较盐度下降的趋势更为明显。从而体现出此突变木霉菌剂的多功能性,使其更加具有应用推广潜力。
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