龟足白垩腺结构及胶体的初步研究

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应用光学显微镜和透射电子显微镜对龟足(Capitulum mitella)白垩腺的组织学和超微结构进行观察。龟足的白垩腺由腺细胞和管道系统组成,整个外周覆有一层结缔组织膜。腺细胞为单细胞腺,腺细胞的发育与个体发育不同步。年幼腺细胞较小,形态为圆形或椭圆形,细胞核也为圆形或椭圆形。随着腺细胞的发育,细胞及细胞核逐渐变大,形状不规则具多态性。成熟腺细胞的细胞质电子密度高,充满大量粗面内质网和游离的核糖体;线粒体也很丰富,但未见高尔基体。细胞质内含丰富的颗粒状物质以及大小不一的囊泡。细胞质中小囊泡的聚集和融合形成了大囊泡即胞内管。管道系统根据位置和功能划分为四个层次:胞内管、收集管、次级管、初级管。收集管、次级管、初级管的管壁均由单层上皮细胞组成,初级管较收集管和次级管大且内腔衬有几丁质层。收集管的管壁上皮细胞与腺细胞形成隔状连接,各级管壁上皮细胞之间也形成隔状连接,这种结构保证了管道的紧密性。将龟足次生胶分别置于浓度为1%、2%、5%的SDS-2Me溶液内,38℃恒温5d,离心,收集溶解液,不能溶解部分再加入SDS-2Me溶液,如此反复两次,整个过程历时15d。结果表明胶体在1%SDS-2Me溶液的平均溶解量为50.3%,胶体在2%的SDS-2Me溶液平均溶解量为57.0%,胶体在5%的SDS-2Me溶液的平均溶解量为51.7%。将胶样置于6M盐酸胍的10mM磷酸钠缓冲液中,测得平均溶解量为23.8%。经过6M盐酸胍的10mM磷酸钠缓冲液处理后不可溶部分再置于0.5M的DTT的7M盐酸胍的20mMEDTA的1.5M Tris-HCl的溶液中处理,60℃恒温震荡1h,之后加入2.5倍重量的碘乙酸,避光处理20min,再加入过量的巯基乙醇(2-Me)处理,测得平均溶解量为72.4%。采用聚丙烯酰胺垂直不连续凝胶电泳的方法对几种溶剂处理所得的溶解液进行分析,并对蛋白带的条数、分子量、染色强度等方面进行比较。结果表明分子量为36kD的蛋白是它们共有的,而且染色较深,说明含量很高,不同溶解液跑出的条带数目从1条到7条。对龟足次生胶和36kD蛋白组分进行氨基酸组成的分析。结果表明次生胶的氨基酸组成中含量高的三种氨基酸是Gly/Arg、Leu,它们的含量都超过了10%,但是Cys的含量很低;次生胶中主要组成蛋白36kD的氨基酸组成中含量高的三种氨基酸是Glu、Cys、Pro,三者总和超过了60%。
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