【摘 要】
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目的:探讨Rho/Rock通路在肺纤维化中的作用及外源性硫化氢抗肺纤维化的可能机制,为治疗肺纤维化提供新的实验依据。方法:使用10%DMEM培养液+1%青链霉素培养小鼠肺成纤维细胞(N
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目的:探讨Rho/Rock通路在肺纤维化中的作用及外源性硫化氢抗肺纤维化的可能机制,为治疗肺纤维化提供新的实验依据。方法:使用10%DMEM培养液+1%青链霉素培养小鼠肺成纤维细胞(NIH3T3细胞),放置37℃下5%CO2培养箱中。等细胞融合至90%,加用0.25%胰酶消化予以传代接种(细胞密度5×104)并放置于培养瓶,待细胞融合至约70%后用于实验。将NIH3T3细胞随机分为A、B、C、D、E5组。各组按以下方法处理:A组(空白对照组):无处理;B组(TGF-β1组):加入TGF-β1(5μg/L);C组(TGF-β1+NaHS组):加入TGF-β1(5μg/L)及NaHS(40μmol/L);D组(TGF-β1+Y-27632组):加入TGF-β1(5μg/L)及Y-27632(10μmol/L);E组(TGF-β1+NaHS+Y-27632组):加入TGF-β1(5μg/L)、NaHS(40μmol/L)及Y-27632(10μmol/L)。NaHS及Y-27632均预先处理1h。使用MTT法检测各组细胞增殖水平;WB检测各组细胞纤维化水平指标α平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原蛋白及Rho/Rock通路中RhoA、Rock1、Rock2蛋白的表达水平;细胞划痕实验检测各组细胞的迁移距离。结果:1、通过MTT检测细胞存活率发现:B组细胞12h、24h、48h的细胞存活率明显高于D组,C组,E组及A组,差异均有统计学意义(P<0.05);D组细胞12h、24h、48h的细胞存活率高于C组和E组。2、蛋白质免疫印迹结果显示:B组α-SMA、I型胶原蛋白、RhoA、Rock1、Rock2蛋白的表达水平明显高于A、D组、C组、E组,差异均有统计学意义(P<0.05)。D组α-SMA和I型胶原蛋白高于C组、E组,差异有统计学意义(P<0.05)。D组RhoA、Rock1、Rock2蛋白高于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。3、细胞划痕实验结果:TGF-β1组12h、24h和36h细胞迁徙距离大于A组、C组、D、E组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:外源性硫化氢抑制TGF-β诱导的小鼠肺成纤维细胞增殖,其机制可能与抑制Rho/Rock信号通路有关。
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