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【目的】:胃癌是第二大引起癌症相关死亡的疾病,也是我国主要恶性肿瘤之一,具有高发病率、高转移率等特点。作为一种严重危害人类健康的疾病,侵袭转移是胃癌主要的致死因素,然而迄今为止,胃癌的转移机制尚未完全阐明,研究胃癌侵袭与转移的信号转导机制显得尤为重要。我们前期研究发现CDK5RAP3在胃癌中扮演着抑癌的角色,CDK5RAP3表达与胃癌患者预后、胃癌细胞增殖等密切相关,本课题拟探讨CDK5RAP3与胃癌侵袭转移的关系及作用机制,为胃癌治疗提供新的靶点和干预方法。【方法】:1.利用包装好的慢病毒构建稳定过表达CDK5RAP3基因及稳定敲除CDK5RAP3基因的胃癌细胞株HGC-27和NUGC-3;2.利用Transwell小室实验检测CDK5RAP3蛋白在胃癌细胞中的表达变化给细胞迁移能力带来的影响;3.利用尾静脉注射构建裸鼠尾静脉注射模型,在裸鼠体内观察CDK5RAP3基因对胃癌细胞迁移能力的影响;4.利用CDK5RAP3的质粒干预NUGC-3细胞,再利用Western blot实验初步观察CDK5RAP3表达变化对下游机制的影响;5.在构建的稳定过表达CDK5RAP3基因及稳定敲除CDK5RAP3基因的胃癌细胞株HGC-27及NUGC-3中,采用q PCR技术观察CDK5RAP3表达变化对EMT通路主要蛋白转录水平的影响,采用Western Bloting技术观察CDK5RAP3表达变化对EMT通路主要蛋白翻译水平的影响。【结果】:1.利用包装好的慢病毒成功构建稳定过表达及稳定敲除CDK5RAP3基因的胃癌细胞株HGC-27及NUGC-3,并且观察到CDK5RAP3蛋白的表达量会影响胃癌细胞株的形态学变化;2.采用Transwell小室实验观察到过表达CDK5RAP3蛋白会抑制胃癌细胞的迁移能力,而下调CDK5RAP3蛋白的表达量则会促进胃癌细胞的迁移能力;3.利用构建的裸鼠尾静脉注射模型,本课题观察到下调CDK5RAP3蛋白的表达量会使胃癌细胞在裸鼠体内更容易转移,并且下调CDK5RAP3蛋白表达量后胃癌细胞更容易让裸鼠死亡;4.CDK5RAP3蛋白表达的改变会影响EMT通路主要蛋白E-cadherin、N-cadherin、ZO-1及Vimentin的转录水平。5.CDK5RAP3蛋白表达的改变会影响EMT通路主要蛋白E-cadherin、N-cadherin、ZO-1及Vimentin的蛋白表达。【结论】:1.CDK5RAP3基因可以改变胃癌细胞的形态学;2.CDK5RAP3基因会抑制胃癌细胞的迁移能力;3.CDK5RAP3基因可以影响EMT通路主要蛋白E-cadherin、N-cadherin、ZO-1及Vimentin的转录水平及蛋白表达。