不同铜污染水平下植物促生细菌的筛选及其对苏丹草生长与富集铜的影响

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矿区废弃地重金属污染土壤治理成为研究的重要课题,植物修复技术逐渐成为热点。能源植物较强的适应性,可被用作矿区废弃地污染的修复材料,利用能源植物来修复矿区废弃地,不仅可以解决污染土壤的修复问题,还可以产生生物质能源原料。植物的生物量决定了植物对重金属污染土壤的修复效率和修复效果。因此,选择优良的能源植物,筛选到高效、促进植物生长的植物促生菌,是研究的关键。禾本科能源植物苏丹草(Sorghum sudanense(Piper)Stapf.)有较强的适应性,不仅生长快、根系发达,且生物量较大。本试验研究不同Cu污染水平对苏丹草生长和吸收Cu的影响,试验结果表明:苏丹草对Cu的富集总量随着土壤中Cu污染水平的增加而升高,在低水平Cu污染(LS)的土壤中苏丹草对Cu的积累量达到163.77μg,在高水平Cu污染(HS)的土壤中苏丹草对Cu的积累量达到3811.10μG。本文通过聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)手段研究了不同Cu污染水平下,苏丹草非根际、根际土壤细菌的群落结构,发现高水平的Cu污染对苏丹草非根际、根际土壤细菌群落结构产生显著影响。对不同Cu污染环境中细菌具有的特定生物学特性的研究发现:LS中菌株产吲哚乙酸(IAA)、铁载体、1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶和精氨酸脱羧酶(ADC)的比例高于MS、HS。本试验以细菌对Cu的抗性和产ACC脱氨酶的能力作为初筛指标从苏丹草根际、非根际土壤及根内共分离筛选到6株具有Cu抗性和产ACC脱氨酶的菌株:K3-2、K3-9、N3G-5、K1-6、H1F-7和N2G-9。对它们的生物学特性进行测定发现这些菌株都具有多种促生特性,能够适应多种环境,对Cu和抗生素也都具有一定的抗性。通过16SrRNA基因序列的测定发现,K3-2和K3-9属于产气肠杆菌属,K1-6属于根瘤菌属,N3G-5属于微杆菌属,H1F-7属于芽孢杆菌属,N2G-9株属于不动杆菌属。在水琼脂平皿条件下,研究了 6株供试菌株在不同Cu浓度环境中对苏丹草幼苗生长和吸收Cu的影响。结果表明供试菌株在Cu浓度为0 mg.L-1的环境中对于苏丹草幼苗有较强的促生作用,当Cu浓度升至4 mg·L-1时供试菌株提高了苏丹草幼苗对Cu的耐受性,并筛选到一株具有Cu抗性的内生促生细菌K3-2(Enterobacter aerogenes)。通过对供试菌株K3-2(Enterobacter aerogenes)进行土壤盆栽试验来研究K3-2在不同Cu污染水平(LS、MS、HS)下对苏丹草生长和吸收富集Cu的影响。结果表明,供试菌株K3-2能提高可培养细菌的总数量和植物促生细菌的比例;随着土壤中Cu浓度的增加,Cu对苏丹草生长的抑制作用越来越明显,接菌K3-2处理的LS、MS、HS苏丹草根部干重比接灭活菌K3-2的对照处理分别增加了 14.69%,21.45%和27.96%,均差异显著(p<0.05),MS苏丹草地上部干重比对照增加了 21.22%,差异显著(p<0.05);接种Cu抗性内生促生菌在一定程度上降低了根际土壤的pH,但却增加了土壤中水溶态Cu的含量;植物组织中的Cu含量和植物的富集总量随着土壤中Cu浓度的升高而增加;在LS、MS、HS中,接菌K3-2能促进苏丹草根部对Cu的吸收或向地上部转运,使苏丹草地上部Cu的富集总量分别提高了 10.49%,59.91%和40.30%,根部Cu的富集总量分别提高了 3.64%,73.71%和58.17%,后两者均达到显著差异(p<0.05)。由此可见,供试菌株K3-2能显著促进苏丹草的生长,活化土壤中重金属Cu,强化苏丹草对土壤中Cu的吸收富集。
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