目的：构建检测海、鸟、堪萨斯、偶发分枝杆菌的四重荧光定量PCR，探讨荧光定量PCR技术检测非结核分枝杆菌（NTM）的优缺点，为NTM感染的诊断提供更加简便、可靠的实验室方法。　　方法：通过总结前期研究成果和检索现有文献，分别查找扩增海分枝杆菌、鸟分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌及偶发分枝杆菌四种感染手部常见NTM基因序列的特异引物和通用引物。首先用通用引物PCR扩增标准菌DNA后测序，测序结果用GeneBank数据库比对以验证标准菌符合要求；其次用普通PCR验证多重特异引物的特异性；然后用特异引物构建四重荧光定量PCR，分别检测以上四种标准菌DNA，评估荧光定量PCR的特异性及敏感性；最后用该四重荧光定量PCR检测16份海、鸟、堪萨斯、偶发分枝杆菌感染的标本。　　结果：1、查找到4对分别扩增海、鸟、堪萨斯、偶发分枝杆菌基因序列的特异引物及1对特异扩增NTM基因序列的通用引物；2、构建了能检测海、鸟、堪萨斯、偶发分枝杆菌四种感染手部常见NTM的荧光定量PCR方法；3、该荧光定量PCR可检测NTM的DNA浓度为5.2fg/μl，低于普通PCR最低检测浓度（52fg/μl）；4、该四重FQ-PCR检测16份临床标本，11份标本结果为阳性，其中海分枝杆菌4份，鸟分枝杆菌3份，堪萨斯分枝杆菌2份，偶发分枝杆菌2份，经多重普通PCR检测，无标本出现两种以上NTM的感染；5、该四重荧光定量PCR检测NTM所需时间约为3小时。　　结论：本研究建立的FQ-PCR能检测海分枝杆菌、鸟分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌四种手部感染常见的NTM，可快捷、准确、灵敏地诊断这四种NTM所致感染，为临床诊断NTM感染提供了新的检测方法。