【摘 要】
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目的:拟对课题组前期发现的冠心病相关SLC22A3基因intron7区域中的2段DNA负性调控序列的性质及功能进行研究,以明确其为沉默子还是绝缘子。方法:利用生物信息学分析两段负性调控序列在所培养细胞系中的脱氧核糖核酸酶I(DNaseI)敏感性,并以包含人SLC22A3基因全长序列的细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)为模板,PCR扩增两负性调控
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目的:拟对课题组前期发现的冠心病相关SLC22A3基因intron7区域中的2段DNA负性调控序列的性质及功能进行研究,以明确其为沉默子还是绝缘子。方法:利用生物信息学分析两段负性调控序列在所培养细胞系中的脱氧核糖核酸酶I(DNaseI)敏感性,并以包含人SLC22A3基因全长序列的细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)为模板,PCR扩增两负性调控序列,以pGL3-Control质粒作为工具载体,将两段序列克隆入报告基因Luciferase(LUC)的启动子与增强子之间以及增强子的下游,构建4组重组质粒,并以pGL3-Control质粒作为空白对照,与内参质粒pRL-SV40共转染人胚肾细胞HEK293T,24h后检测荧光素酶活性。结果:两段负性调控序列均位于DNaseⅠ超敏位点,明确了其为顺式调控元件的性质。4组重组质粒pGL3-con-SLCi7-447X、pGL3-con-SLCi7-447S、pGL3-con-SLCi7-460X以及pG L3-conSLCi7-460S荧光素酶活性分别为(2.353±0.323)、(3.046±0.415)、(3.016±0.119)、(3.833±0.282),相较于空白对照pGL3-Control(7.423±0.230),荧光素酶活性均明显降低(P<0.05)。结论:SLC22A3基因的intron7区域中存在2个负性调控元件,其负性调控作用不受位置的影响,发挥沉默子调控功能,为进一步对冠心病相关SLC22A3基因的表达调控的研究提供了理论依据。
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