前言 妊娠高血压综合征（简称妊高征）是导致孕产妇和婴儿病死率增高的主要原因，目前认为由高血压状态所导致的全身及肾内多种细胞因子、血管活性物质等的改变在妊高征的发生、发展中起着关键作用，这些异常改变导致多器官系统的病理性损害（如肾脏、肝脏、心脏等），其中肾功能损伤是妊高征早期发病特征，肾脏特征性病理损害主要表现为：肾小球毛细血管壁及基底膜增厚，肾小球增大与缺血。发生机制尚不清楚，近年来，细胞内信号转导系统作为连接细胞外刺激与细胞功能调节的纽带越来越受到国内、外学者的关注。在妊高征形成过程中发挥作用的各种活性因子和生长因子均通过特异受体，经过细胞内信号传递产生转录因子、启动特定核内基因的表达而产生生物学效应。 蛋白激酶是细胞内诸多信号转导系统相互影响的中心环节，其中蛋白激酶C（PKC）做为一组丝／苏氨酸蛋白激酶，广泛分布于真核细胞特别是哺乳类动物细胞中，通过对底物蛋白的磷酸化而广泛参与激素和细胞因子等的细胞内信号转导、离子通道调节、基因表达控制等机体的一系列重要过程。PKC是由多种同工酶组成的蛋白质家族，可分为三组：c PKC，又称传统PKC，包括α、β、γ等，是一组Ca²⁺依赖，二酰基甘油激活的同工酶；nPKC，也叫新PKC，包括δ、η、θ，是非依赖Ca²⁺、但二酰基甘油依赖的一组同工酶；a PKC，即非典型PKC，包括ξ和λ两种亚型，体外实验证明即不依赖Ca²⁺、也非二酰基甘油激活。PKC的多种亚型在不同细胞中的定位、表达和功能的不同使得PKC可以参与多种信号传递，其中PKC-α在肾脏中广泛存在，专一地在细胞质中表达，并且与细胞膜具有高度的相关性，对维持肾脏功能起着重要作用。 丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）是一族在脊椎类动物体内广泛存在的蛋白质丝氨酸／苏氨酸激酶，是目前发现的最主要的一个生长信号调节蛋白，是细胞内多种促细胞增殖信息传递的共同通路或称会聚点，是细胞表型变化和增殖的蛋白激酶。MAPK主要有三个成员组成，即细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、应激活化蛋白激酶（JNK）和蛋白激酶玛8，此外，最近还克隆出一个新成员一大丝裂素活化蛋白激酶1，或称ERKs。其中ERK主要为r僻4MAPK和衅ZMAPK，与细胞生长、分化和增殖的调控关系最为密切。PKC作为MAPK的上游信号分子，可激活MAPK，尤其是PKC的同工酶如a、5、s可通过不同的机制调节ERK的活性，并且这种调节作用是细胞类型特异的。细胞外各种刺激信号通过不同的信息传递通路，共同交汇于PKC，激活的PKC通过依赖或非依赖ras机制激活MAPK，由此形成PKC一MAPK级联反应，其中ERKI/2通路是迄今研究最多的一条MAPK信号转导通路，生长因子可激活ERKI/2，活化的ERKI/2移位人核磷酸化一系列转录因子，引起细胞增殖、分化。目前，国内、外尚无有关PKC、MAPK与妊高征肾脏损害关系的研究。 临床上无特效治疗妊高征肾脏损害的药物，我们有使用肝素治疗妊高征的经验，但由于肝素易导致出血，故临床未推广。低分子量肝素（LM-WH）是从普通肝素中提取出来的，具有出血副作用较少，生物利用度较高等特点，生物作用主要为抗凝、扩张血管、降低血压，减少肾小球系膜细胞和基底膜细胞的增殖等。本实验通过制备妊高征动物模型并用LMWH进行干预治疗，观察PKC及MAPK在妊高征肾脏损伤中蛋白基因表达变化及LMWH对妊高征肾脏损伤的预防和治疗作用，并探讨妊高征肾脏损伤机制以及LMWH发生作用的可能细胞内信号传导机制。实验材料与方法 1.实验动物:取健康孕龄Wistar雄性大鼠和雌性大鼠，体重200一209，周龄14一16周，由中国医科大学实验动物部提供。 2.妊高征动物模型的制备:按照方法取Wistar大鼠，按雌雄1:2合笼，饲养环境安静清洁、室温18℃一25℃，不控制饲料和水。次晨取雌鼠阴道分泌物镜检，发现精子为妊娠第1天。 3.实验动物分组:将妊娠大鼠分为三组，每组各巧只:正常妊娠组、妊高征组及LMWH治疗组;另取巧只健康未孕雌性大鼠为正常对照组。三组均于妊娠第13天起测量大鼠尾动脉血压，记录收缩压、舒张压及平均动脉压，每日一次;并于用药之日始，隔日收集24h尿量以测定尿蛋白。 4.标本收集和实验室检查:于妊娠第21天在戊巴比妥钠（50m留kg）麻醉下，剖宫取胎，记录胎仔体重，身长;同时抽取腹腔静脉血，分离血清以待测定血尿素氮，血肌醉;取左肾部分置于10%甲醛液浸泡固定，待用现染色、PAS染色及免疫组织化学染色;另取部分肾脏剪成体积约le扩大小组织块，生理盐水冲洗至发白，一70℃保存。 24h尿蛋白定量采用磺柳酸一硫酸钠比浊法，以牛血清白蛋白为标准蛋白;血肌醉采用苦味酸法，血尿素氮采用二乙酞一厉法，并计算血肌配、血尿素氮。 5.PKC、MAPK活性测定及蛋白定量 将处理后的肾脏组织，PBS洗后加人细胞裂解液，成分为:EDTA（100mM）Znil，EGTA（100mM）10rnl，IM TriS/HCI（pH 7.5）20Inl，Suerose8·69，去离子水溶解定容100ml。超声粉碎后，120以)xg，4℃，离心Zh，吸取上清备用。PKC反应体系:以Histone Hl为底物?