产致贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing E.coli,STEC)感染可导致人类出现腹泻(Diarrhea)、出血性结肠炎(Hemorrhagic Colitis,HC)等一些胃肠道疾病,这些疾病往往是复杂的,产生潜在致命的全身性后遗症,如神经系统损伤和溶血性尿毒综合症(Hemolytic Uremic Syndrome,HUS)。STEC 可分泌两种志贺毒素(Stx),志贺毒素 Ⅰ型(StxⅠ)和志贺毒素Ⅱ型(StxⅡ)。Stx在肠腔的产生是与胃肠道疾病密切相关的。一小部分Stx穿过上皮细胞进入血循环,引起特定靶组织的血管损伤,如脑、肾血管损伤。一旦STEC感染暴发,就很难控制,且具有强烈的致病性、致死性等特点,严重危害人类的生命健康,已成为世界性的公共卫生问题。因此迫切需要一种直接、快速、准确的方法,从感染者血液中检测出毒素,以利于及时的诊断治疗。本文通过构建双抗体夹心ELISA法,检测Ⅰ型志贺毒素(StxⅠ)和Ⅱ型志贺毒素(StxⅡ),提高临床产志贺毒素大肠杆菌(STEC)感染的诊断效率。对于StxⅠ,用重组Ⅰ型志贺毒素A亚单位(StxIA)免疫小鼠,制备杂交瘤抗体,从中筛选出非竞争性的两株单抗,构建双抗体夹心法ELISA检测体系,并对实验样品中的志贺毒素进行检测。共获得4株针对StxⅠA的单克隆抗体,分别为1H2-G7,2H1-C12,8E7-E6和2F6-F8。只有8E7-E6/2F6-F8组合,并且只有当8E7-E6作为包被抗体,而2F6-F8作为检测抗体时,其检测毒素的OD值最高。检测样品中的Stx,结果表明该检测方法只对StxⅠ进行有效识别,对StxⅡ不识别。成功构建了基于双抗体夹心ELISA法用于检测StxⅠ。对于StxⅡ,应用已制备的StxⅡ特异性杂交瘤细胞株,筛选、鉴定最佳抗体配对,构建双抗体夹心ELISA检测体系,并对其特异性和敏感性进行评价。从获得的多株单抗分子中,成功筛选出最佳配对抗体S2D8和S2C6,构建基于S2D8/S2C6的双抗体夹心ELISA检测体系,该体系对StxⅡ纯品的检测底限是4ng/ml,并成功从STEC培养上清中检测出StxⅡ及其变种,而与StxⅠ不结合,显示出良好的敏感性和特异性。总之,8E7-E6/2F6-F8和S2D8/S2C6组合的双抗体夹心法ELISA检测试剂的制备,为基于毒素分子作为靶分子的STEC免疫诊断、治疗研究奠定了基础。