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非生物胁迫,尤其是盐胁迫是作物减产的主要原因。近年来研究表明Na+/H+逆向转运蛋白在应对盐胁迫上具有重要作用,液泡膜上的H+-Ppase质子泵为Na+/H+逆向转运蛋白提供H+驱动力。因此,克隆H+-Ppase质子泵基因并转入植物体内可提高植物的耐盐能力。本文选择盐生植物大米草作为材料,进行大米草的H+-Ppase基因SaVP1克隆,并进行生物信息学分析和烟草转基因耐盐试验,获得如下主要结果。
1.利用RACE技术,从大米草中克隆了H+-Ppase基因SaVP1。SaVP1序列全长2506bp,共编码667个氨基酸。
2.生物信息学分析表明,SaVP1的核苷酸序列及其推到出的氨基酸序列与其他植物的液泡膜H+-Ppase基因有一定的相似性。其核苷酸序列和氨基酸序列与卡拉草(Leptochloa fusca)LfVP1基因的同源性分别为94%和99%。
3.构建SaVP1基因植物表达载体pCAMBIA1301-SaVP1,利用农杆菌介导法转化烟草,对转基因烟草苗进行PCR检测,获得了阳性转基因株。
4.对5个转基因烟草株系进行盐分的耐受性试验结果显示,在300mMNaCl浓度胁迫下,4个转基因烟草株系仍能正常生长,但在400mMNaCl浓度下全部死亡;而野生型烟草在200mMNaCl 浓度胁迫下不能正常生长,表明SaVP1转基因株能提高烟草耐盐性。