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目的:应用反义P44转染人肝癌细胞SMMC-7721,观察转染后细胞内野生型p44、xpd、cdk7、cdk2、cdc25A、c-myc等基因的表达变化以及对细胞生长的影响。探讨P44基因与xpd、cdk7、cdk2、cdc25A,c-myc的相互作用,以及对细胞周期的影响。
方法:应用P44反义寡核苷酸转染人肝癌细胞SMMC-7721,并用人肝癌细胞SMMC-1721作为空白对照。用RT—PCR法检测细胞克隆中P44 mRNA表达,用RT-PCR、Western blot法检测转染P44反义寡核苷酸后细胞内人剪切修复基因xpd以及癌基因cdk7、cdk2,cdc25A、c-myc的表达量变化,并用MTT和流式细胞仪检测细胞增殖及其细胞周期的变化。
结果:P44基因反义寡核苷酸转染人肝癌细胞SMMC-7721后,具有抑癌作用的人剪切修复基因xpd mRNA的表达量显著减少,肝癌内的分子网络出现相应的变化,细胞周期调控基因cdk7、cdk2、cdc25A、c-myc表达量的上调,XPD对细胞增殖的抑制作用减弱,肝癌细胞增殖明显。
结论:具有抑癌作用的XPD基因受其上游调控基因P44的调节,XPD的作用需要有P44的参与;当用针对P44基因的反义寡核苷酸封住P44后,XPD基因表达下调,cdk7、cdk2、cdc25A、c-myc表达量上调,细胞增殖显著。