目的:1.建立反相高效液相梯度洗脱法测定人血浆中异丙酚浓度,为群体药物代谢动力学研究奠定方法学基础。2.进行新疆地区肿瘤患者的异丙酚群体药物代谢动力学研究并建立群体药物代谢动力学模型,估算出相应的药物代谢动力学参数,分析身高、体重、年龄、种族等因素对相应的药物代谢动力学参数的影响。3.探讨用微透析技术对脂溶性药物异丙酚进行采样的可行性,考察灌注速度、灌注液成分以及微透析媒介对异丙酚微透析探针回收率的影响,为微透析技术应用于脂溶性分析物提供科学依据。方法:1.高效液相实验:以卡马西平为内标,色谱柱为Hanbon Science&.Technology C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相以乙腈/甲醇混合液(乙腈-甲醇按80:20(v/v)的比例配制,作为有机相)-水(水相加1%的三氟乙酸调ph值到4)进行二元梯度洗脱,0~7 min(50:50,v/v),7~9 min(50:50~70:30,v/v),9~22 min(70:30,v/v);流流速为1.0 ml/min,检测波长为274 nm,进样量为20μL,柱温为40℃。2.群体药物代谢动力学研究:采集新疆医科大学第三附属医院95例(汉族54例,维吾尔族32例,哈萨克族9例)用异丙酚进行麻醉手术的肿瘤患者的血样,用高效液相色谱法检测血药浓度。采用Excel、SPSS 20.0进行血药浓度数据整理、统计,采用Monolix 4.3.3群体药物代谢动力学软件进行分析。在选取的基础的三房室药代动力学模型的基础上,将年龄、性别、体重、民族等固定效应对应于中央室清除率(CL)、中央室表观分布容积(V1)、浅周边室清除率(Q2)、浅周边室表观分布容积(V2)、深周边室清除率(Q3)和深周边室表观分布容积(V3)这六个药动学参数分别进行作图分析,如果存在一定的相关性,则逐一引入模型。采用向前纳入法和向后剔除法建立全量回归模型。采用随机近似期望最大化(SAEM)算法,建立最终模型。采用直观预测检验法(VPC)对最终模型进行内部验证。3.微透析实验:体外采用增量法和减量法实验评估探针的回收率,使用高效液相色谱法检测分析物浓度,探讨脂溶性分析物异丙酚进行微透析采样的可行性。考察相同实验条件下,不同的灌注速度对异丙酚乳剂探针回收率的影响;不同的微透析媒介对探针回收率的影响;灌注液中含不同浓度羟丙基-β-环糊精的灌注液对异丙酚乳剂和异丙酚对照品溶液探针回收率的影响。结果:1.高效液相实验:异丙酚的血药浓度在0.10~25μg/mL内线性良好(r=0.999 8),定量限为0.10μg/mL;高(12.50μg/m L)、中(1.56μg/ml)、低(0.19μg/ml)3个浓度的平均方法回收率均在85%~115%之间,相对标准偏差(rsd)均<10%;日内、日间rsd均<10%。2.群体药物代谢动力学研究:估算的六个群体药物代谢动力学参数如下:中央室清除率(cl)=7.78-0.069*agei,单位:l/min;中央室表观分布容积(v1)=13.4l;浅周边室清除率(q2)=1.47+0.749*log(bwi/63),单位:l/min;浅周边室表观分布容积(v2)=54.9l;深周边室清除率(q3)=0.1l/min;深周边室表观分布容积(v3)=171l。体重因素与浅周边室清除率(q2)具有很明显正相关性,与中央室表观分布容积(v1)、浅周边室表观分布容积(v2)具有一定的相关性;年龄因素与中央室清除率(cl)具有很明显的负相关性,与浅周边室清除率(q2)和中央室表观分布容积(v1)具有一定的相关性。3.微透析实验:①灌注速度的影响:各个流速下异丙酚乳剂增量法实验和减量法实验的回收率值均存在显著性差异(p<0.01)。流速为1.0μl/min时,增量法和减量法实验回收率的均值高于其它流速,增量法和减量法实验的回收率值分别为0.33%和45.68%,且二者的相关性也最强(r2=0.96)。②灌注液中不含羟丙基-β-环糊精时,异丙酚乳剂与异丙酚对照品溶液的回收率比较:乳剂减量法的回收率值高于增量法;对照品减量法的回收率值高于增量法;乳剂增量法的回收率值高于对照品;对照品减量法的回收率值高于乳剂。③灌注液中加入羟丙基-β-环糊精时,乳剂与对照品增量法和减量法回收率的比较:对于乳剂,六种加入量下均为减量法的回收率高于增量法;对于对照品,加入量为1%(w/v)时,减量法的回收率值均高于增量法,加入量为10%(w/v)时,增量法的回收率值总体上高于减量法,加入量为20%(w/v)时,减量法的回收率值总体上高于增量法。④相同的羟丙基-β-环糊精加入量(1%、10%、20%,w/v)下,乳剂与对照品的回收率比较:对于增量法实验,对照品的回收率值总体上高于乳剂;对于减量法实验,加入量为1%时,对照品的回收率值总体上高于乳剂,加入量为10%时,乳剂的回收率值总体上高于对照品;加入量为20%时,0.5~3.5h乳剂的回收率值高于对照品,在4.0~11.0h,二者的回收率值接近。⑤灌注液中加入羟丙基-β-环糊精对乳剂及对照品回收率的影响:增量法的回收率:对于乳剂,在羟丙基-β-环糊精加入量为0.5%~10%(w/v)的范围内,回收率值随加入量的增加而增大,但在10%~20%(w/v)的加入量范围内,回收率值反而加入量的增加而减小;对照品增量法的回收率值也有相似的趋势。减量法的回收率:对于乳剂,羟丙基-β-环糊精加入量为0.5%~10%(w/v)时,对回收率值影响不大,但加入量为15%、20%(w/v)时,回收率略有降低。对于对照品,加入量为1%(w/v)时对回收率值影响不大,加入10%、20%(w/v)时,回收率值显著降低。结论:1.高效液相实验:本研究所建立的高效液相色谱法灵敏、准确、简单,可用于异丙酚的血药浓度检测和群体药物代谢动力学研究。2.群体药物代谢动力学研究:通过考察人口统计学特征因素对新疆肿瘤患者异丙酚群体药动学参数的影响,运用Monolix药动学软件建立了符合新疆地区肿瘤患者人群特征的异丙酚的群体药物代谢动力学模型,所估算的群体药代动力学参数可以较好地反应新疆地区肿瘤患者异丙酚的群体特征。3.微透析实验:脂溶性物质异丙酚的微透析探针回收率比一般水溶性物质要低。增量法的回收率值和减量法的回收率值存在差异性和相关性,需用减量法实验代替增量法实验对探针进行校正。灌注液中添加羟丙基-β-环糊精可以提高增量法的回收率值。