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目的:建立大鼠缺血再灌注模型,探讨电针“通督调神”针法是否通过调节自噬反应相关蛋白P62,Beclin-1和LAMP2a的表达,改善缺血再灌注大鼠神经功能。结合组织病理染色和电子透射技术观察自噬在脑缺血疾病中的作用机制,为“通督调神”针法治疗临床脑缺血疾病积累理论基础与治疗靶点。方法:将60只SPF级SD(Sprague-Dawley)大鼠应用随机字表法分为造模30只,空白组15只,假手术组15只。根据改良版Longa线栓法造模,制备大鼠左侧大脑中动脉栓塞缺血再灌注模型(Middle Cerebral Artery Occlusion ang Reperfusion,MCAO/R),2h后退出线栓进行再灌注处理,假手术组15只大鼠,只成功分离血管后缝合不做栓塞处理。造模后进行Zea Longa神经行为学评分,评定造模实验是否成功。将造模成功的30只大鼠分为模型组(n=15)、电针组(n=15),造模后第二天开始“通督调神”针法干预,电针组(n=15)施以“通督调神”针法,电针频率为1/20Hz,疏密波,30min/次,每天1次,共干预7天,空白组(n=15)、假手术组(n=15)、模型组(n=15)每日只进行同等条件抓取不做其他干预。在干预的第1、3、5、7天进行Zea-longa 5级评分法评定神经功能缺损和改善情况。干预结束后取材,采用TTC(triphenyl tetrazolium chloride)染色实验观察电针对缺血再灌注大鼠缺血侧组织形体及脑梗死面积的影响;采用透射电镜观察电针干预后大鼠缺血侧皮质区神经细胞形态结构变化;采用Western Blot法检测各组大鼠缺血侧皮质区自噬相关蛋白P62,Beclin 1和LAMP2a的表达。结果:1.神经行为学评分结果显示:空白组和假手术组并无神经功能缺损症状,均为0分。与空白组和假手术组比较,造模后模型组与电针组的神经功能评分增高(P<0.05)。干预7天后,与空白组和假手术组相比,模型组的神经功能评分增高(P<0.05)。与模型组相比,电针组的神经功能评分减低(P<0.05)。结果表明“通督调神”针法可有效改善缺血再灌注大鼠的神经功能缺损症状。2.脑梗死面积结果显示:空白组与假手术组无缺血梗死病灶,造模后各组间缺血再灌注大鼠并无明显差异(P>0.05),造模后与空白组和假手术组比较,模型组与电针组有梗死缺血灶,差异有统计学意义(P<0.05)。“通督调神”针法电针干预7天后,与模型组比较,电针组梗死面积减小,差异有统计学意义(P<0.05)。3.透射电镜观察缺血侧皮质区超微结构:从结构上观察缺血再灌注大鼠缺血侧皮质区神经细胞的形态结构,空白组与假手术组神经细胞结构完整,胞质内细胞器结构完整,数量丰富。与空白组和假手术组比较模型组神经细胞轮廓模糊,细胞膜破损,线粒体出现肿胀,甚至出现空泡状,细胞内可见少量自噬体生成。与模型组比较电针组神经细胞轮廓较清晰,提示在改善脑损伤过程中,自噬调节可能发挥重要作用。4.Western Blot检测结果显示:Beclin-1蛋白的表达,与空白组和假手术组比较,模型组和电针组蛋白表达均增加,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,电针组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。P62蛋白的表达,与空白组和假手术组比较,模型组蛋白表达增加,电针组蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,电针组蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。LAMP2a蛋白的表达,与空白组和假手术组比较,模型组蛋白表达降低,电针组蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,电针组蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结果表明,电针干预缺血再灌注大鼠,改善大鼠的神经功能损伤,与调节自噬相关蛋白的表达密切相关。结论:“通督调神”针法可改善脑缺血再灌注损伤大鼠脑梗死范围、正向调节脑神经细胞超微结构、调节自噬相关蛋白P62,Beclin-1和LAMP2a表达水平,进而保护脑神经功能,这可能是针刺改善MCAO/R大鼠神经功能的机制之一。