小麦条锈菌效应蛋白Pst14872靶标的鉴定及功能分析

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小麦作为我国一种重要粮食作物,种植范围广泛,其生产安全也直接关乎我国的国计民生。小麦条锈病是小麦上常见病害之一,它是由条形柄锈菌小麦专化型(Puccinia striiformis f.sp.tritici)引起的,严重危害小麦的生产。目前,主要通过培育抗病品种和使用化学药剂来防治条锈病,但由于条锈菌毒性变异频繁且变异方式多样,易导致已有的抗病品种抗病性减弱甚至丧失,使防治难度加大。有研究表明,小麦条锈菌在侵染过程中会通过吸器分泌一些致病因子——效应蛋白,来调控寄主的抗病反应。因此,为了加深人们对小麦条锈菌致病机制的理解,同时指导人们对小麦条锈病的防控防治,对这些致病因子的研究具有一定的理论意义。在前期研究中,我们筛选到一个小麦条锈菌的效应蛋白Pst14872。以此为基础,利用酵母筛库技术筛选获得几个候选靶标,并利用酵母双杂交、Pull-down和Co-IP试验证实Pst14872的互作靶标为TaClpS1。为明确靶标TaClpS1的功能,我们做了进一步的试验。TaClpS1基因序列分析表明,TaClpS1基因编码162个氨基酸,并包含一个进化保守的结构域ClpS。TaClpS1特异定位于小麦原生质体的叶绿体中。q RT-PCR实验发现靶标TaClpS1受条锈菌侵染诱导上调表达。利用病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)沉默掉TaClpS1后,导致小麦对条锈菌的抗性增强,接菌24 h时叶片中的活性氧面积显著增加,病程相关蛋白基因TaPR1和TaPR2的表达量明显增加。另外,组织学观察发现接菌24 h时吸器数及菌丝分支长度和120 h的菌丝面积有所减少。综上结果说明,小麦条锈菌效应蛋白Pst14872与靶标TaClpS1互作,并且TaClpS1负向调控小麦抗条锈病的防卫反应。
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