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目的:在建立多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠的基础上,观察中药补肾调经汤对模型大鼠血清胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、性激素结合球蛋白(SHBG)、游离睾酮指数(FAI)以及卵巢mi R-21表达的影响。探讨PCOS的发病机理及补肾调经汤调整雄激素、胰岛素水平的机制,为其临床应用提供实验依据。方法:选择7～8周龄(体重175～185g)雌性SD大鼠,适应性喂养并观察动情周期后,将动情周期正常的48只大鼠随机分为空白组12只、PCOS模型组36只(空白组:PCOS模型组=1:3)。空白组以1%CMC溶液灌胃,普通饲料、饮水;模型组采用来曲唑造模法造模,以0.125mg/ml浓度的来曲唑溶液灌胃,同时高脂饮食喂养,日常饮水用5%葡萄糖溶液替代;连续灌胃27天,建立PCOS大鼠模型。造模完成后,所有大鼠行阴道脱落细胞涂片检查,随机抽取空白组2只、模型组6只,采用血糖仪测定空腹血糖(FPG),用酶联免疫法(ELISA)测定睾酮(T)、空腹胰岛素(FINS),计算HOMA-IR值,观察卵巢组织形态评估造模是否成功。验证造模成功后,将模型组大鼠随机分为:模型对照组、中药组、西药组,3组每组各10只。模型对照组以1%羧甲基纤维素(CMC)溶液灌胃,中药组予补肾调经汤灌胃,西药组予二甲双胍溶液灌胃,以上3组实验全程采用高脂饮食喂养,5%葡萄糖溶液替代日常饮水,空白组以1%CMC溶液灌胃,普通饲料、饮水,连续给药21天。第21天所有大鼠禁食水过夜,次日早上取鼠尾静脉血以血糖仪测定FPG,处死大鼠,采用ELISA法测定血清FINS、T、SHBG,取大鼠双侧卵巢,一侧卵巢用于观察组织形态学变化,另一侧卵巢应用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法测定mi R-21含量。结果:1.模型评估:(1)一般情况:空白组大鼠精神、活动反应、摄食饮水等一般情况良好,而模型组表现为形体肥胖、倦怠嗜卧、活动减少、对外界刺激反应不灵敏,日常进食量、饮水量、尿量均大于空白组。(2)大鼠体重:从造模1周后开始,模型组与空白组大鼠体重出现明显差异(P<0.01),模型组大鼠的体重远远高于空白组。(3)大鼠阴道脱落细胞涂片提示:空白组大鼠均具有规律的动情周期,模型组大鼠可见动情间期延长或动情周期紊乱。(4)随机抽取空白组大鼠2只,模型组大鼠6只(空白组:模型组=1:3)验证造模是否成功。结果示:模型组大鼠血清FINS、T均较空白组明显升高(P<0.05),模型组大鼠与空白组大鼠的FPG无明显差异(P>0.05),根据公式计算HOMA-IR显示模型组大鼠HOMA-IR水平明显高于空白组(P<0.05)。(5)大鼠卵巢组织形态学变化:肉眼观察,模型组大鼠卵巢体积比空白组更大且卵巢长径更长;模型组大鼠卵巢颜色苍白且表面可见透明囊状扩张细胞,空白组卵巢颜色红润。HE染色:正常大鼠卵巢光镜下可见多个数目的黄体和不同发育时期的卵泡,卵泡结构完整,可见卵细胞、卵丘、透明带、放射冠结构,卵泡内颗粒细胞呈多层,多为8～9层,膜泡膜细胞及间质细胞无增生,无囊状扩张卵泡。PCOS模型大鼠的卵巢结构紊乱,有较多数量的囊状扩张卵泡、闭锁卵泡出现,黄体数量及发育阶段的卵泡数目明显减少,卵泡内不见卵母细胞和放射冠,颗粒细胞凋亡,细胞层数仅为1～2层或消失,卵泡膜细胞及间质细胞增生。以上结果提示,模型组大鼠造模成功。2.给药干预后评价:(1)一般情况:空白组大鼠精神、活动反应、摄食饮水等一般情况良好,对外界刺激反应灵敏;模型对照组仍表现为形体肥胖、倦怠嗜卧、对外界刺激反应迟钝,日常进食量、饮水量、尿量均大于空白组;中药组、西药组大鼠精神状态良好、反应灵敏,西药组大鼠进食量少于中药组。(2)大鼠体重:用药治疗后中药组、西药组大鼠体重均较模型对照组明显下降(P<0.05),西药组大鼠体重下降更为显著(P<0.05)。(3)动情周期:中药组、西药组经过治疗后动情周期逐渐恢复,趋于正常;模型对照组仍表现为动情周期紊乱、延长或停滞。(4)大鼠HOMA-IR、SHBG、FAI水平:补肾调经汤及二甲双胍均可有效降低HOMA-IR、FAI水平,有效提高SHBG水平,与模型对照组相比有统计学意义(P<0.05)。(5)大鼠卵巢组织形态学变化:用药治疗后,中药组、西药组大鼠卵巢光镜下可见一定数量的黄体和处于不同发育阶段的卵泡,卵泡内颗粒细胞呈多层;模型对照组大鼠卵巢发育阶段的卵泡、黄体数量、颗粒细胞层数仍表现为明显减少,闭锁卵泡数目较多,可见多个囊状扩张细胞。(6)大鼠卵巢mi R-21表达:中药组、西药组卵巢mi R-21的表达明显高于模型对照组(P<0.05)。结论:1.运用来曲唑造模法联合高脂饮食喂养,可以成功建立PCOS大鼠模型;2.补肾调经汤和二甲双胍均有降低PCOS模型大鼠血清HOMA-IR、FAI水平的作用,补肾调经汤和二甲双胍均能提高PCOS模型大鼠血清SHBG水平;3.补肾调经汤和二甲双胍均能提高PCOS模型大鼠卵巢组织mi R-21的表达;4.PCOS的发病机制可能与高雄激素、胰岛素抵抗有关,卵巢mi R-21的表达异常或功能障碍会影响卵泡的正常发育、激素的合成代谢;补肾调经汤可能通过改善高雄激素及胰岛素抵抗的现象,有效改善PCOS模型大鼠的卵泡发育及卵巢排卵状况,从而有效治疗PCOS。