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SARS ( Severe Acute Respiratory Syndrome)是一种传染性强、病死率高、严重危害人民生命健康的传染病。世界卫生组织于2003年4月6日宣布引起SARS的病原体是一种新的病毒,属于冠状病毒家族,称为SARS相关冠状病毒(SARS-Associated coronavirus, SARS-CoV )。SARS-CoV表现出许多不同于冠状病毒的特性,为冠状病毒中一个新的分支。目前,病毒性疾病尚无特效治疗方法,对于SARS也是一样。所以,控制SARS的最好办法是预防,而疫苗的开发则是建立有效防范措施的关键环节。DNA疫苗是继灭活疫苗、亚单位疫苗之后的第三代疫苗,具有许多的优越性。所以本研究选择了SARS病毒DNA疫苗这一方向,以SARS-CoV主要结构蛋白S、N、E和M蛋白基因作为研究对象。构建针对SARS-CoV结构蛋白基因的重组核酸疫苗,观察其免疫小鼠后机体的特异性免疫应答的情况,探讨其作为SARS-CoV疫苗的可能性。本研究由两部分组成:第一部分为SARS-CoV结构蛋白基因重组核酸疫苗的构建。从GenBank上获得SARS(BJ01)S、N、E和M蛋白基因的序列,使用引物设计软件Primer6.0进行引物设计。以SARS-CoV(BJ01)cDNA为模板,合适条件下进行PCR,获得SARS-CoV SARS-CoV S、N、E和M蛋白基因片段。经酶切处理后,定向克隆于pVAX1真核表达载体,构建包含SARS-CoV S、N、E和M基因片段的重组质粒pVAX/S、pVAX/N、pVAX/E和pVAX/M。经酶切和测序等方法鉴定重组质粒的正确性。然后利用间接免疫荧光法鉴定重组质粒的体外表达。将重组质粒瞬时转染真核细胞。48小时后IFA试验检测目的基因的表达产物的活性。第二部分为真核表达质粒pVAX/S、pVAX/N、pVAX/E和pVAX/M在小鼠体内的免疫原性研究。将重组质粒按100ug/只肌肉注射BALB/c小鼠,第一次免疫后2周进行加强免疫,4周后进行第三次免疫。试验分为空载体组,实验组。在免疫后的2、4、6、8、10周分别采集并分离小鼠血清。用流式细胞仪检测相关细胞因子TNF、IFN-?、IL-5、IL-4、Il-2水平。实验结果显示,重组质粒DNA免疫小鼠后能够诱导机体产生特异的细胞免疫和体液免疫应答。这为进一步研制安全、有效的SARS DNA疫苗奠定了基础。