健脾药膳对衰老大鼠抗氧化及调控Caspase-3、Caspase-8蛋白酶的研究

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目的:注射D-gal构造衰老大鼠,给予衰老大鼠健脾药膳灌胃的护理措施,评价衰老模型是否成功;分析比较健脾药膳作用于衰老大鼠后氧化和凋亡指标的变化及出现变化可能涉及的机制。材料与方法:选取SPF级3个月健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠30只,随机分为空白、模型、中药药膳3组,每组10只。空白组腹部皮下给予0.9%生理盐水125mg/kg·d-1,模型和药膳组分别腹部皮下给予7.5%D-gal(125mg/kg·d-1),造模过程共持续6w。造模成功后进行实验干预,药膳组实施健脾药膳干预(10ml/kg·d-1),空白组和模型组给予等体积的米汤干预,实验干预共持续4w。最后一次灌胃24h之后,腹腔麻醉行腹后迅速剥离股直肌,用HE染色制作骨骼肌切片并镜下观察细胞形态学变化,用ELISA技术检测骨骼肌中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性和丙二醛(MDA)的含量。用PCR技术检验骨骼肌中半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3mRNA)和半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8 mRNA)的表达量。结果:1.D-gal注射造模后,模型组大鼠与空白组大鼠相比较,体重增长速度减缓,背部毛色发黄、枯燥且容易掉落,嗜睡,反应迟缓,摄食量减少,无成形便;而中药药膳组大鼠与模型组大鼠比较后,发现上述行为学得到改善,体重有增长趋势,脊背部毛发有光亮,精神状态良好,摄食量增加,二便逐渐得以恢复。2.HE染色可见空白组大鼠骨骼肌切片中肌细胞的肌纤维呈多边形,胞核靠近肌细胞内膜;模型组大鼠骨骼肌切片中肌细胞的肌纤维形状似椭圆或多角型,细胞核移位,细胞质变薄。3.ELISA结果显示,模型组骨骼肌SOD、GSH-PX浓度低于空白组(P<0.01),而骨骼肌MDA浓度超过空白组(P<0.01);药膳组骨骼肌SOD浓度超过模型组(P<0.05)、骨骼肌GSH-PX浓度超过模型组(P<0.01),药膳组骨骼肌MDA浓度则低于模型组(P<0.05)。4.PCR结果表明,模型组与空白组比较,模型组骨骼肌Caspase-3 mRNA、Caspase-8mRNA表达量超过空白组(P<0.01);药膳组与模型组比较,药膳组骨骼肌Caspase-3mRNA、Caspase-8 mRNA表达量低于模型组(P<0.01)。结论:1.大剂量注射D-gal可以模拟出大鼠衰老状态,且其模拟出的衰老状态与人类机体自然衰老时相符合。2.健脾药膳可以使衰老状态大鼠自由基清除酶SOD和GSH-PX活力提高,脂质过氧化损伤产物MDA含量降低。3.健脾药膳使衰老状态大鼠骨骼肌中凋亡的关键蛋白酶Csapase-3和Caspase-8表达降低。一定程度上阻碍了主动性凋亡进程,并且可能主要是通过死亡受体引导的Caspase路径而发挥作用的。
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