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目的:探讨在体外TGF-β1、CTGF及两者联合诱导BMSCs向软骨细胞分化的能力。在体外建立适合BMSCs向软骨细胞诱导分化的条件,为软骨组织工程种子细胞—BMSCs的研究提供理论依据。 方法:1.采用红细胞裂解液的方法分离提取新西兰大耳兔的BMSCs,在体外进行培养并传代。用倒置显微镜下观察原代及2-5代BMSCs的形态;采用H&E染色及电子显微镜观察第4代BMSCs的形态;用细胞免疫组化法及流式细胞检测技术对第4代BMSCs进行鉴定,检测其细胞表面抗原CD34、CD44及CD29的表达情况。并用台盼蓝染色的方法测定BMSCs活力;用MTT法检测原代及2-6代BMSCs的增殖情况。2.用TGF-β1、CTGF及两者联合诱导第4代BMSCs细胞向软骨细胞定向分化。并采用倒置显微镜及H&E染色观察其形态;用阿利新蓝染色法及甲苯氨蓝染色法检测GAG的表达。3.实验结果计量资料以(X±S)表示,采用数据软件SPSS13.0分析,多组比较采用方差分析,若不满足方差分析条件,进行秩转换后再进行方差分析。假设α=0.05,若P<0.05为差异具有统计学意义。 结果:①用红细胞裂解液的方法能快速分离提取兔BMSCs并能较好的传代培养。②免疫组化法及流式细胞仪法对第4代BMSCs鉴定结果为:BMSCs的表面抗原CD29、CD44阳性表达,而表面抗原CD34阴性表达。③生长曲线显示原代及2-6代BMSCs生长旺盛,其中第4代生长最旺盛。④甲苯胺蓝染色、阿利新蓝染色检测实验组中GAG均有不同程度的阳性表达,且TGF-β1与CTGF联合诱导组明显高于其他2个实验组。 结论:①BMSCs较容易获得,并可传代培养,具有很强的增殖能力。②TGF-β1和CTGF均可促进BMSCs向软骨细胞方向分化,且两者联合使BMSCs向软骨细胞分化更明显。