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共振散射技术作为一种新的分子光谱技术,方法简便、灵敏度高,可用普通的荧光分光光度计测量,因此该方法发展十分迅速,应用领域已经扩展到蛋白质、核酸、药物以及痕量金属离子等诸多方面的分析。本文在前人研究的基础上,继续开拓共振散射技术在免疫分析中的应用。本论文共分四章。
第一章为绪论,介绍了共振散射技术的原理及在生化分析中的应用;综述了金纳米微粒的制备、表征、以及胶体金标记技术在生化分析中的应用;介绍了补体4(C4)、免疫球蛋白M和免疫球蛋白G的分析进展。
第二章在pH7.3 Na2HPO4-KH2PO4缓冲溶液中及聚乙二醇6000(PEG-6000)存在下,补体4(C4)与羊抗人补体4(goat anti-human C4)的免疫复合物可聚集形成疏水的免疫复合物微粒,在350nm、440nm有两个共振散射峰,在390nm有一个同步散射峰。激光散射法测得免疫复合物微粒的平均粒径为3440nm。补体4(C4)浓度在0.18~2.60μg·mL-1范围内与350nm、390nm处的散射强度都呈线性,检出限分别为0.084μg·mL-1、0.11μg·mL-1。该法用于分析正常人血清中补体4(C4),结果满意。
第三章用粒径为10 nm的金纳米微粒标记羊抗人免疫球蛋白M(IgM),制备了IgM的免疫纳米金共振散射光谱探针。在pH4.5的KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液及PEG存在下,金标羊抗人IgM与IgM发生特异性结合生成胶体金免疫复合物,离心分离,获得未反应的金标抗上层清液。以此纳米金标抗作为催化剂,在pH1.9的盐酸一柠檬酸钠缓冲溶液,催化NH2OH·HCl还原吸附在免疫纳米金表面的金络离子物种(AuCl4)生成粒径更大的金纳米微粒,导致580 nm处金纳米微粒的共振散射强度急剧增大。结果表明,随着IgM浓度增大,离心上层液中金标抗降低,I580nm线性降低,其△I580nm与IgM浓度在0.05~4.80 ng· ml-1范围内呈良好的线性关系,检出限为0.03 ng·ml-1。
第四章纳米金、纳米银、纳米铂对葡萄糖还原铜(Ⅱ)生成Cu2O微粒这一慢反应具有较强的催化作用,Cu2O微粒在390 nm、450nm、505nm处产生3个较强的共振散射峰。采用共振散射光谱检测反应产物Cu2O微粒,研究了纳米金标羊抗人IgG对葡萄糖-铜(Ⅱ)反应的催化作用。将IgG-纳米金标羊抗人IgG免疫反应与离心分离技术结合,建立了超痕量IgG的免疫纳米金催化铜增强共振散射光谱新方法。随着IgG浓度增大,离心上层液中纳米金标抗浓度降低,505 nm处的共振散射光强度I505nm线性降低,其降低值△I505nm与IgG浓度CIgG在0.13~53.3ng·ml-1范围内呈良好的线性关系,检出限为0.09 ng·ml-1。本法所用试剂价廉易得、反应易控制、稳定性好、灵敏、快速和高的特异性,用于定量分析人血清中的IgG,结果满意。