共刺激分子B7-H3在支气管哮喘中的作用研究

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目的:研究支气管哮喘患儿外周血中可溶性B7-H3(sB7-H3)的表达水平,并分析其与细胞因子水平的相关性,探讨sB7-H3的异常表达在支气管哮喘急性发作中的临床意义。方法:选取2012年1月~2012年12月在苏州大学附属儿童医院呼吸科住院的支气管哮喘患儿21例,并选取外科择期手术(腹股沟斜疝、血管瘤、腺样体肥大)而住院的患儿16例作为对照组儿童,分为支气管哮喘急性发作期组(A组)、恢复期组(B组)及对照组(C组)。同时采集支气管哮喘患儿急性发作期及恢复期的外周血,以及外科择期手术患儿的外周血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中sB7-H3、IFN-γ、IL-4及IL-10的表达水平,及分析支气管哮喘患儿急性发作期血浆中sB7-H3的水平与细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10的相关性。结果:哮喘急性发作期组血浆中sB7-H3的水平明显高于恢复期组及对照组(P<0.05),而恢复期组虽高于对照组,但无统计学差异;哮喘急性发作期组血浆中IFN-γ、IL-10水平均低于恢复期组及对照组(P<0.05),恢复期与对照组相比无统计学差异;血浆中IL-4的水平在哮喘急性发作期组与恢复期组均高于对照组(P<0.05),且哮喘急性发作期组的表达水平高于恢复期组(P<0.05)。支气管哮喘患儿急性发作期血浆中sB7-H3的表达水平与IL-4的水平具有正相关性,与IFN-γ、IL-10的水平无相关性。结论: sB7-H3在支气管哮喘急性发作期异常高表达;sB7-H3可能通过增强Th2细胞因子的分泌而在支气管哮喘的急性发作期起作用。目的:探讨抗B7-H3单克隆抗体对哮喘小鼠模型诱导期及效应期的治疗作用。方法:6-8周龄雌性BALB/c小鼠(18-20g),随机均分为5组,每组10只,分别为哮喘组(A组),生理盐水对照组(B组),IgG组(C组),抗B7-H3抗体诱导期组(D组),抗B7-H3抗体效应期组(E组)。A、C、D、E组均给予OVA致敏及激发(0、10天给予OVA腹腔注射致敏,第20天给予OVA雾化吸入,每天半小时连续7天),C组、D组在第2,7,11,14,18天分别给予腹腔注射IgG、抗B7-H3抗体,E组在第2,7,11,14,18天给予腹腔注射IgG,第21,24,26天腹腔注射抗B7-H3抗体(OVA雾化1小时前注射)。B组给予同剂量生理盐水注射、激发。各组小鼠于末次激发2小时后麻醉处死,采集标本。小鼠进行肺泡灌洗,肺泡灌洗液(BALF)进行细胞总数计数及分类计数;并采用ELISA测定小鼠BALF中的IFN-γ、IL-4、IL-17的水平;小鼠肺组织切片行HE染色、PAS染色及免疫组化法(SABC法),观察肺组织炎性细胞及嗜酸性细胞浸润情况、气道粘液分泌情况及B7-H3表达情况。结果:哮喘组肺泡灌洗液(BALF)中的细胞总数及嗜酸性细胞数多于生理盐水对照组及抗B7-H3抗体诱导期组,差异具有统计学意义(P<0.05),哮喘组、IgG组、抗B7-H3抗体效应期组BALF中细胞总数及嗜酸性细胞数比较差异无统计学意义,抗B7-H3抗体诱导期组BALF中的细胞总数及嗜酸性细胞数高于生理盐水对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。哮喘组、IgG组、抗B7-H3抗体诱导期组及抗B7-H3抗体效应期组BALF中的IFN-γ的水平均低于生理盐水对照组(P<0.05),哮喘组、IgG组、抗B7-H3抗体效应期组IFN-γ的水平无统计学差异,抗B7-H3抗体诱导期组IFN-γ的水平高于IgG组(P<0.05)。哮喘组、IgG组、抗B7-H3抗体诱导期组及抗B7-H3抗体效应期组BALF中的IL-4、IL-17的水平均高于生理盐水对照组(P<0.05),哮喘组、IgG组、抗B7-H3抗体效应期组IL-4、IL-17水平无统计学差异,抗B7-H3抗体诱导期组IL-4、IL-17水平低于IgG组(P<0.05)。肺组织病理染色显示哮喘组、IgG组、抗B7-H3抗体效应期组炎性细胞、嗜酸性细胞浸润及粘液分泌较抗B7-H3抗体诱导期组明显,生理盐水对照组无明显炎性细胞、嗜酸性细胞浸润、粘液分泌。免疫组化显示哮喘组、IgG组B7-H3高表达,生理盐水对照组B7-H3不表达,抗B7-H3抗体诱导期组、抗B7-H3抗体效应期组B7-H3部分表达。结论:哮喘的诱导期给予抗B7-H3单克隆抗体治疗能通过抑制Th2型细胞因子(IL-4)和Th17型细胞因子(IL-17)的分泌,同时促进Th1型细胞因子(IFN-γ)的分泌,从而减轻OVA致敏哮喘小鼠的气道病理改变。
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