射干为鸢尾科植物射干Belamcanda chinensis(L.)DC.的干燥根茎,是一味重要的中药材。射干始载于《神龙本草经》,性味苦寒,入肝、肺经,具有清热解毒、利咽消痰、散血消肿的功效,主治咽喉肿痛、痰咳气喘等,为常用中药材,且资源丰富。现代研究表明,射干具有抗炎、抗氧化、清除自由基、抗癌、抗菌及抗病毒等重要的药理作用。射干药材中的化学成分包括异黄酮类化合物、醌类、酚类、二环三萜类化合物、甾类化合物及一些微量成分。其中,生药鉴别和药品质量评价均以异黄酮类成分为指标。异黄酮类化合物主要含有鸢尾苷、野鸢尾苷、鸢尾苷元、野鸢尾苷元、次野鸢尾黄素等多种有效成分。本课题以射干药材为研究对象,在文献总结的基础上,通过比较索氏提取、热回流提取、超声提取,微波提取等四种提取方式,选取微波提取技术对射干异黄酮类成分进行制备,采用L9(34)正交设计优化了提取参数;通过HPLC-DAD/ESI-MS/MS技术分离并定性鉴别了射干药材中9种主要的异黄酮类成分;采用高速逆流色谱技术及二维柱切换制备液相色谱技术对射干药材中主要的异黄酮类成分进行了制备;最后对16种不同产地的射干药材进行高效液相色谱指纹图谱比较及其9种主要异黄酮类成分的定量分析。具体内容如下:一、射干异黄酮类成分的提取与含量测定通过比较索氏提取、热回流提取、超声提取,微波提取四种提取方式,证实微波和超声提取异黄酮类成分提取率结果相近,且明显高于热回流和索氏提取;微波提取时间大大少于超声提取时间,因此对微波提取中的提取溶剂、固液比、提取时间及提取温度进行了较为系统的研究,采用L9(34)正交实验设计,正交设计的均值及方差分析得出的最佳提取工艺条件为60%乙醇,乙醇用量为药材的12倍,提取温度75℃,提取10 min。二、射干异黄酮类化学成分的LC-DAD/ESI-MS/MS分析采用高效液相色谱-二极管阵列检测-串联质谱法对射干药材中异黄酮类化学成分进行快速定性鉴识。实验结果表明:通过对色谱和质谱条件的优化,使射干药材中9种主要的异黄酮类化合物在60 min内达到基线分离。根据供试品的总离子流图,并与有关文献报道及质谱资料比对,初步鉴识射干药材中9种异黄酮类化合物分别为鸢尾苷、鸢尾新苷、野鸢尾苷、Irilin D、鸢尾苷元、鸢尾新苷元、野鸢尾黄素、次野鸢尾黄素、白射干素。三、高速逆流色谱法分离制备射干药材中5种异黄酮类成分建立高纯度制备射干药材中5种异黄酮类成分的高速逆流色谱方法,利用高速逆流色谱两种不同的分离体系分别制备得到2种异黄酮苷和3种异黄酮苷元。第一次高速逆流色谱分离的溶剂体系及体积比为正己烷:正丁醇:甲醇:水=1:4:1.5:6,分取上、下相,下相为流动相,转速为850 rpm,流动相速度为1.5 mL/min,800 mg射干药材微波提取物溶于60 mL下相中,分四次连续进样,根据检测器图谱接收目标化合物。随后对第一次高速逆流色谱分离体系中主要含有鸢尾苷元的固定相液进行回收,并应用氯仿:甲醇:水=4:2.7:2溶剂体系进行第二次高速逆流色谱分离制备,转速为860 rpm,流动相速度为2.0 mL/min,根据检测器图谱接收目标化合物。最终得到了鸢尾苷、野鸢尾苷、鸢尾苷元、野鸢尾黄素和次野鸢尾黄素5种异黄酮类化合物单体。四、射干异黄酮类化合物的二维柱切换制备液相色谱法研究以六通切换阀代替传统定量蓄积环,使得从一维到二维的切割体积不再受定量环容积的限制,扩大了方法的应用范围;同时保证样品组分在二维色谱柱之间100%的切换率,极大地提高了分离的效率。当加大进样量时,在一维制备柱中难以与干扰组分分离的鸢尾苷、野鸢尾苷、野鸢尾黄素和次野鸢尾黄素在线切换到第二维制备柱中进行分离,结合连续进样大幅度减少单次分离制备的消耗时间和消耗溶剂,从而建立了射干药材中5种主要异黄酮类化学成分分离纯化的HPLC-HPLC高效、快速在线分析制备技术。从1.5 g射干药材微波提取物中获得鸢尾苷87.2 mg,野鸢尾苷108.9 mg,鸢尾苷元24.2 mg,野鸢尾黄素81.8 mg和次野鸢尾黄素53.7 mg。经HPLC纯度分析检测结果可知5种异黄酮类化合物单体的纯度均大于98.6%。五、不同产地的射干药材中异黄酮类成分的含量测定建立了高效液相色谱同时测定射干药材中9种异黄酮类指标成分(鸢尾苷、鸢尾新苷、野鸢尾苷、Irilin D、鸢尾苷元、鸢尾新苷元、野鸢尾黄素、次野鸢尾黄素和白射干素)的含量分析方法。考察了16种不同产地射干药材中9种异黄酮类成分的含量。结果表明,产地不同其9种主要异黄酮类成分的含量也存在明显差异。结果表明山西、湖南、广西、云南等主产地的射干异黄酮类成分含量高,进一步佐证了这些产地的射干为道地药材,对射干药用资源开发利用有一定的提示作用。