本文主要从以下几个部分展开论述：　　第一部分 胶质瘤细胞对BRD4抑制剂的敏感性与HEXIM1表达水平相关　　目的：　　(1)体外实验论证胶质瘤细胞中HEXIM1表达水平与JQ1敏感性的关系。　　(2)初步验证乌苯美司在胶质瘤中是否具有协同BRD4抑制剂的作用，这种作用是否与HEXIM1表达水平相关。　　方法：　　(1)采用WST-1法鉴定JQ1在胶质瘤细胞系中的作用。选取3种胶质瘤细胞系进行测试（U87、T98G及U251），将3种细胞株用不同浓度的JQ1（从10nm到5um）处理72小时，72小时后进行细胞增殖实验，检测各株细胞对JQ1敏感性的差异。(2)用Western Blot检测HEXIM1在3种细胞系中的表达，论证HEXIM1表达与JQ1敏感性的相关性;(3)用HEXIMl SiRNA下调HEXIM1在U87M及T98G细胞中的表达（HEXIM1在U251细胞中的基础表达量非常低，无法对其进行下调实验）。经Western Blot验证HEXIM1表达下调后（图2A），对HEXIM1下调组(Si-HEXIM1)、空载体组(Si-control)及对照组细胞用JQ1处理后进行WST-1分析，论证干预HEXIM1对胶质瘤细胞株JQ1敏感性的影响。(4)用WST-1法鉴定乌苯美司在胶质瘤细胞对JQ1敏感性中的作用。在加JQ1前先用乌苯美司(0.5mg/ml)预处理胶质瘤细胞48小时，对比乌苯美司预处理组与单用JQ1组的增殖抑制效率。(5)用HEXIMl SiRNA下调HEXIM1在U87M及T98G细胞中的表达，将HEXIM1 siRNA组，空载体及对照组3组胶质瘤细胞均用乌苯美（0.5mg/ml，48小时）进行预处理，然后再用不同浓度JQ1(10nm～5um)处理72小时，用WST-1法检测以上细胞的增殖活性。(6)用JQ1或JQ1联合乌苯美司处理U87M空白对照及HEXIM1下调后的U87M细胞，用AnnexinⅤ-PI染色及流式细胞仪评估上述细胞的凋亡率。　　结果：　　(1)JQ1处理后3种胶质瘤细胞株的增值均受到抑制，而且显示出明显的计量依赖性，U87M、T98G和U251细胞株的的IC50值分别是65nM、480nM及3010nM。提示:3种胶质瘤细胞系对JQ1显示出不同的敏感性。(2)HEXIM1在U87M细胞系中表达量最高，而在U251细胞系中表达量最低，提示HEXIM1与胶质瘤对JQ1的敏感性密切相关。(3)U87M、T98G2组胶质瘤细胞系中HEXIM1下调组与对照组相比胶质瘤细胞对JQ1的敏感性均明显下降，HEXIM1siRNA处理后的U87M及T98G细胞IC50值分别升至110 nM及750nM。(4)单用乌苯美司预处理对3种胶质瘤细胞均无毒性作用，但是乌苯美司可增强胶质瘤细胞对JQ1的敏感性，U87M、T98G及U251的IC50值分别降低至50nM、235nM及830nM。(5)下调HEXIM1能使乌苯美司增强后的JQ1敏感性降低。与乌苯美司预处理的细胞相比，HEXIM1下调后的U87M及T98G细胞株JQ1IC50值分别由原来的50nM、235nM增高至70 nM及380 nM。乌苯美司对空白对照组及HEXIM1下调组细胞的JQ1敏感性均有增强作用。(6)JQ1可诱导U87M细胞凋亡，下调HEXIM1可以使JQ1的促凋亡作用减弱。(7)乌苯美司无论在空白对照组还是HEXIM1下调组细胞中都能够增强JQ1诱导凋亡的作用。　　结论：　　(1)胶质瘤细胞对JQ1敏感性的差异与HEXIM1的表达水平密切相关，通过调节HEXIM1表达，可以影响胶质瘤细胞对JQ1的敏感性。　　(2)乌苯美司可增加胶质瘤细胞对JQ1的敏感性，其作用可能与上调HEXIM1表达相关。　　(3)HEXIM1在JQ1诱导的肿瘤细胞凋亡中发挥着重要作用，乌苯美司可以增强JQ1的促凋亡作用。　　第二部分 乌苯美司通过调节自噬水平、上调HEXIM1的表达增加胶质瘤细胞对JQ1治疗敏感性　　目的：　　通过体外实验及体内实验论证调节HEXIM1自噬性降解对胶质瘤细胞JQ1敏感性的影响，探索乌苯美司增加胶质瘤细胞对JQ1敏感性的作用机制。　　方法：　　(1)使用乌苯美司预处理U87M、T98G和U251三组胶质瘤细胞株，应用western blot的方法检测乌苯美司处理前后HEXIM1表达的变化，同时测定自噬相关指标P62和LC3B的表达;(2)用电镜检测乌苯美司预处理的胶质瘤细胞内自噬小体的变化，进一步验证自噬;(3)用JQ1及JQ1结合乌苯美司处理U87M胶质瘤细胞，应用免疫组化的方式检测HEXIM1的表达;(4)使用自噬激活剂雷帕霉素（10nm，与乌苯美司同时应用）激活自噬，应用western blot的方法检测HEXMI的表达水平的变化;(5)应用对JQ1敏感性较低的T98G和U251细胞株构建荷瘤小鼠模型，分别给予JQ1或JQ1联合乌苯美司灌胃，处死后称量肿瘤重量，测量肿瘤体积，体内论证乌苯美司对JQ1抑瘤作用的辅助作用。(6)获取肿瘤组织后行IHC免疫组化染色，检测HEXIM1的表达，论证HEXIM1在乌苯美司增敏JQ1治疗中的作用。(7)在U251移植小鼠死亡后，对其尸体进行解剖，以观察肺、肝脏及骨骼是否存在转移灶，论证乌苯美司对胶质瘤转移的抑制作用。　　结果：　　(1)使用乌苯美司预处理的三组胶质瘤细胞株均表现出显著的HEXIM1表达上调，同时P62表达上调，LC3B表达降低，提示自噬水平下调。(2)电镜结果显示使用乌苯美司预处理的胶质瘤细胞内自噬小体明显减少。(3)单用JQ1处理不能影响HEXIM1的表达，然而乌苯美司结合JQ1处理胶质瘤细胞导致HEXIM1的表达显著增加。(4)使用雷帕霉素激活自噬后胶质瘤细胞内HEXMI的表达水平明显降低。(5)体内实验表明，经灌胃途径应用JQ1可以显著缩小小鼠体内的的肿瘤体积，T98G移植瘤模型对JQ1的敏感性高于U251，与体外研究一致。(6)JQ1联合乌苯美司口服治疗可以使体内肿瘤生长延缓或萎缩速度加快，提示乌苯美司可以增强JQ1控制体内胶质瘤体积的作用。(7)乌苯美司处理后的肿瘤组织HEXIM1的表达增高，与体外实验结果一致。(8)与单用JQ1相比，联合乌苯美司口服治疗可显著降低胶质瘤的转移率(0/20 VS3/20)，而JQ1治疗组与对照组(DMSO组)之间无显著差异(4/20 VS3/20)。　　结论：　　(1)乌苯美司抑制胶质瘤细胞内自噬水平，下调HEXIM1自噬性降解，使HEXIM1表达上调。　　(2)上调胶质瘤细胞自噬水平，可导致HEXIM1自噬性降解水平上调，进而导致HEXIM1表达下调，使胶质瘤细胞株对JQ1敏感性下调。　　(3)体内试验进一步证实，乌苯美司可以上调HEXIM1的表达，增强JQ1的抑瘤作用（延缓肿瘤生长、抑制肿瘤转移）。　　第三部分 Akt信号通路在乌苯美司增强JQ1敏感性及抑制胶质瘤细胞侵袭性中的作用　　目的：　　探讨Akt信号通路在乌苯美司增强JQ1敏感性及抑制胶质瘤细胞侵袭性中的作用　　方法：　　(1)用Weston Blot检测乌苯美司处理对胶质瘤细胞Akt信号通路的磷酸化水平的影响。(2)用WST—1细胞增殖及活力实验论证Akt信号通路在乌苯美司增加胶质瘤JQ1敏感性中的作用。使用Akt激动剂调节胶质瘤细胞内Akt信号通水平后，观察乌苯美司对JQ1增敏作用的变化，论证抑制Akt信号通路在乌苯美司增加胶质瘤JQ1敏感性中的作用。(3)使用Transwell实验论证乌苯美司对胶质瘤细胞侵袭能力的影响，同时使用Akt激动剂调节胶质瘤细胞内Akt信号通水平后，观察乌苯美司抑制胶质瘤细胞侵袭能力作用的变化，论证抑制Akt信号通路在乌苯美司抑制胶质瘤侵袭转移能力中的作用。　　结果：　　(1)乌苯美司处理胶质瘤细胞时Akt信号通路的磷酸化水平明显降低(p-Akt-ser437)。(2)使用Akt激动剂（10nM）后，乌苯美司增加胶质瘤细胞JQ1的敏感性的作用减弱(P＜0.05)，提示抑制Akt信号通路可能是乌苯美司增敏JQ1治疗的重要机制之一。(3)Transwell实验并未发现JQ1对胶质瘤细胞侵袭能力有显著促进作用，但是联合应用JQ1和乌苯美司后可显著抑制胶质瘤细胞侵袭能力。(4)使用Akt激动剂上调胶质瘤细胞内Akt信号通水平后，乌苯美司抑制胶质瘤细胞侵袭能力的作用被削弱，提示抑制Akt信号通路在乌苯美司抑制胶质瘤侵袭转移能力中扮演重要角色。　　结论：　　(1)抑制Akt信号通路是乌苯美司增强胶质瘤细胞JQ1敏感性的作用机制之一。　　(2)乌苯美司联合JQ1可抑制胶质瘤细胞侵袭性，其作用机制与抑制Akt信号通路有关。