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人骨髓间充质干细胞(human Mesenchymal Stem Cells,hMSCs)是存在于骨髓中具有高度自我更新和多向分化潜能的干细胞群体,是近年来干细胞研究领域的一个热点。hMSCs是组织工程和再生医学的理想种子细胞,在临床具有广阔的应用前景。 近十年来干细胞生物学研究领域的突破,使人们对hMSCs的生物学特性有了较深入的认识,但迄今为止尚未发现其特异表面膜标志,现行的分离方法主要是根据hMSCs的生长特性、表型特征和所具有的多向分化潜能进行评判,影响因素多,操作繁琐,费用昂贵,所得细胞均一性尚不理想,且不同实验室之间数据的可比性差。因而人们一直在努力寻找特异的hMSCs的标记分子。 本研究以分离培养的hMSCs免疫BALB/C小鼠,采用杂交瘤技术制备抗hMSCs的单克隆抗体,并通过间接免疫荧光、免疫组织化学及流式细胞术等方法对其生物学特性作了初步的鉴定,并以制备的单克隆抗体作探针,用于hMSCs的分选及表面特异性膜分子研究。 实验方法 1.hMSCs的分离培养与鉴定:从正常健康供者获取骨髓,以Ficoll-paque分离液分离获取单个核细胞层经培养后,弃去非贴壁细胞,以10%胎牛血清的