研究背景先天免疫是动物启动适应性免疫应答的基础,由于无脊椎动物仅具有先天免疫系统,所以最初关于动物先天免疫机理的研究主要在无脊椎动物中进行,并且经过长期的努力获得了飞跃性的进展。在先天免疫调控过程中,对病原分子的识别是宿主非常重要的第一道防线。Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是细胞上存在的一种普遍而且重要的先天免疫相关的模式识别受体。哺乳动物的不同TLR受体可以识别不同病原表面的病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs)。宿主识别不同的PAMPs后,引发下游不同的信号传递,进而引起下游的核转录因子激活与免疫效应因子如促炎症细胞因子的表达。在无脊椎动物中,果蝇的Toll信号途径最早被发现并报道,但与脊椎动物的TLR信号途径相比,对其信号识别和传递过程,还有许多未知的地方。自1992年以来,以对虾为代表的无脊椎动物海产养殖业发展迅速但病害频发,尤其是白斑综合征病毒(WSSV),其对对虾养殖业造成了巨大经济损失。鉴于此,多国科研人员纷纷开展对虾抗病毒免疫机理的研究。近年来,对虾免疫系统的多种相关信号蛋白分子的功能已经被逐渐揭示出来,但是大部分研究还是针对单基因功能与表达水平的研究,没有形成对虾中免疫信号传递过程的系统认识。例如,目前已经发现对虾中存在多种TLR受体可能参与病原感染,但是这些受体是否在病毒感染中发挥作用,其引发的下游信号传导过程如何都还有待研究。科学问题及意义本论文中,我们将根据实验要求运用多种生物化学与分子生物学手段,鉴定出对虾中参与识别病毒感染的重要MjTLR受体,并揭示病毒感染所引发的信号转导过程中重要的功能蛋白以及这些蛋白发挥作用的分子机理。为了解对虾中病毒感染相关信号途径的转导和控制对虾病毒病以及提高对虾的先天免疫提供帮助。结果及创新点总结研究结果表明日本囊对虾中存在一条TLR3-TRAF6/Ecsit泛素化-Dorsal-ie1促进病毒复制信号途径。MjTLR3识别病毒感染感染后,促进日本囊对虾中MjTRAF6的上调表达、泛素化增加和与MjEcsit的相互作用的增加。MjTRAF6通过RING结构域与MATH结构域与MjEcsit相互作用,而其TRAF结构域不与MjEcsit相互作用;病毒感染促进MjTRAF6的泛素化进而介导MjEcsit的泛素化,泛素化的MjEcsit与MjDorsal相互作用增加,且入核增加,在核内泛素化的MjEcsit通过蛋白酶体依赖的途径被降解,释放MjDorsal与病毒ie1启动子结合促进ie1基因的转录并促进病毒的复制,降低对虾存活率。MjTLR1则通过引发相反的信号传递过程抑制这一信号传递,进而抑制病毒的复制,提升对虾的存活率。而MjTLR2的功能则不明显。研究的创新点:1、阐明了对虾中三种MjTLRs在WSSV感染中的不同作用,MjTLR1和MjTLR3分别启动抑制和促进病毒复制的信号途径;MjTLR2则作用不明显;2、阐明了在日本囊对虾中,功能蛋白MjTRAF6与MjEcsit在MjTLRs信号途径下游通过发生相互作用和泛素化增强,促进MjDorsal与ie1启动子结合和ie1基因的转录从而促进病毒复制;3、确定了对虾中存在一条TLR3-TRAF6/Ecsit泛素化-Dorsal-ie1促病毒复制的信号途径。