目的:通过EGFP慢病毒感染大鼠脂肪干细胞(ADSCs)进行标记,经局部皮下注射移植入同种异体正常大鼠体内,利用荧光显微镜及免疫组化检测移植细胞在大鼠体内的分布、迁移和定居情况,评价EGFP慢病毒对大鼠脂肪干细胞的标记及示踪效果。方法:提取培养大鼠脂肪干细胞,HE染色查看细胞形态,成骨、成脂、成软骨多向诱导分化。CCK8法绘制脂肪干细胞生长曲线。慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因以不同的感染复数(Multiplicity of infection,MOI)转染ADSCs(MOI=0、1、5、10、25、50),流式细胞仪测转染率。CCK8法检测标记后脂肪干细胞(EGFP—ADSCs)的增殖能力。标记后的脂肪干细胞成骨诱导14天、成脂诱导21天、成软骨诱导14天后分别进行碱性磷酸酶、油红O及阿尔新蓝染色检测。将标记后的细胞注射到同种异体大鼠皮下,术后7天,14天,28天取移植部位及主要脏器(心、肝、脾、肺、肾、脑)行冰冻切片荧光观察及免疫组织化学染色,观察EGFP—ADSCs在体内的表达情况。结果:提取大鼠脂肪干细胞24h后见少量贴壁细胞,形态多不规则。传代后细胞形态呈长梭形,分布方向规律。取第三代脂肪干细胞行HE染色,细胞核染为蓝色,胞质为红色,形态规则呈长梭形。增殖曲线成“S”型。脂肪干细胞向成骨、成脂、成软骨细胞方向分化。MOI=0、1、5、10、25、50的转染率分别是0.12%、3.62%、42.4%、66.6%、90.4%、98.0%。CCK8法测转染组(MOI=25)与未转染组(MOI=0)细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。EGFP—ADSCs经诱导后仍向成骨、成脂、成软骨细胞方向分化。7天,14天,28天EGFP表达主要存在于移植部位,而主要脏器未见EGFP表达。结论:1、慢病毒介导的EGFP基因标记大鼠脂肪干细胞最适感染复数为25,标记后的脂肪干细胞有良好的细胞活性,对细胞生物学特性无影响,可以用于ADSCs的示踪性研究。2、经局部皮下移植ADSCs后,于7天、14天及28天在注射部位均可观察到EGFP的荧光表达及EGFP免疫组化阳性细胞。随着移植时间的延长,移植细胞数量减少,同时在主要脏器(心、肝、脾、肺、肾、脑)未检测到移植细胞分布。