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本文通过应用PCR-RFLP分析、组织培养、物候观测、生长发育调查和生理指标测定等方法和手段,对东北连翘、金钟连翘和金缘连翘进行了定性和定量的比较分析,旨在探索金缘连翘的变异来源、组培快繁和越冬性,为金缘连翘的推广应用提供理论依据。
应用PCR-RFLP技术对东北连翘、金钟连翘和金缘连翘三种材料的细胞核基因组DNA进行遗传变异分析。通用引物扩增出片段,然后用10种限制性内切酶对其进行酶切,共检测到240条DNA片段,其中210条具有多态性,占87.5%。所有的90种引物/酶组合中,得到清晰稳定的50种引物/酶组合,其中在14份材料中有32种引物/酶组合(占60.4%)能检测到多态性。结果表明:金缘连翘、金钟连翘和东北连翘细胞核基因组间存在明显遗传相似性和差异性;金缘连翘与金钟连翘有较近的亲缘关系,金缘连翘与东北连翘表现出较远的亲缘关系,表明金缘连翘是金钟连翘的变异。
以金缘连翘茎段为外植体,探索金缘连翘组织培养快速繁殖各阶段的最佳培养基配方及培养程序。结果表明:金缘连翘初代培养途径最适培养基配方为MS+BA3.0 mg·L<-1>+NAA0.08mg·L<-1>+IBA0.08mg·L<-1>.幼苗生长快;愈伤组织途径增殖最佳培养基为MS+BA2.0mg·L<-1>+NAA0.08mg·L<-1>+IBA0.08w mg·L<-1>较好;生根阶段的最适培养基为MS+BA2.0mg·L<-1>+NAA0.04mg·L<-1>+IBA0.04mg·L<-1>,生根率可达80%以上,根系粗壮,生长迅速。
通过低温胁迫处理,金缘连翘与东北连翘、金钟连翘的幼苗的生理生化指标都有较大的变化,而且因种类的不同,而呈现不同的幅度变化。脯氨酸含量、可溶性糖含量、丙二醛含量随低温处理时间的增加而增大。这三种连翘叶片中的脯氨酸含量都表现为增加,但有些在低温胁迫一段时间后,脯氨酸含量达到最高点,然后随胁迫时间增加而降低。依据叶片在低温胁迫条件下的生理生化指标的变化将三种连翘抗寒性按由大到小的排序排列为:东北连翘≥金钟连翘>金缘连翘,但金缘连翘与金钟连翘抗寒性差异很小。