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韭菜迟眼蕈蚊(Bradysia odoriphaga)是危害韭菜等百合科蔬菜的一种重要害虫,可导致韭菜大量减产。性别决定与分化是影响韭菜迟眼蕈蚊生殖、发育和种群结构的关键因素,doublesex(dsx)基因是控制昆虫性别分化的关键基因。但迄今为止对于韭菜迟眼蕈蚊dsx还没有相关报道。为了研究韭菜迟眼蕈蚊的性别决定基因dsx,我们基于韭菜迟眼蕈蚊转录组数据,比对到Bodsx相关片段,采用RT-PCR与RACE方法克隆出Bodsx基因,利用生物信息软件对所得到的序列进行结构域预测、氨基酸序列比对和系统发育分析。采用定量PCR方法研究了dsx基因在韭菜迟眼蕈蚊不同发育时期的表达情况。采用RNAi技术初步研究了dsx基因在韭菜迟眼蕈蚊体细胞性别决定中的作用。具体结论如下:1.克隆了韭菜迟眼蕈蚊的Bodsx基因,扩增出4条序列,包括6个外显子,其中2个剪切体分别是非性特异性剪切体。预测了韭菜迟眼蕈蚊dsx蛋白,分为雌性特异性蛋白BoDSXF和雄性特异性蛋白BoDSXM。发现BoDSX具有保守的OD1与OD2结构域,这2个结构域主要参与DNA与蛋白质的相互作用。发现了Bodsx具有双翅目昆虫dsx保守结构域:RNA结合蛋白靶序列,内含子沉默序列和蜂类重复序列。2.定量分析发现,韭菜迟眼蕈蚊Bodsx基因从卵期开始表达,3龄期开始上调,最后在成虫期达到最高且雄成虫期表达量显著高于雌虫。3.研究了韭菜迟眼蕈蚊Bodsx基因在发育过程中的功能。Bodsx基因沉默后导致雄性体长和生殖刺突缩短,雌性翅长缩短。Bodsx沉默后还可能影响雄虫的交配能力。韭菜迟眼蕈蚊Bodsx具有保守的昆虫dsx的结构和表达模式,初步研究了Bodsx基因在韭菜迟眼蕈蚊性别决定中的作用。研究结果有助于了解韭菜迟眼蕈蚊性别决定的分子机制,为研究通过控制性别特异特征发育基因来控制韭菜迟眼蕈蚊危害提供新思路。