【摘 要】
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果蔬作物中农业化学品超标问题切实关系到我国居民健康,特别是常见杀虫剂和除草剂等类型的农药,因使用场景众多、残留检出频繁以及潜在毒性风险等因素而备受关注。对此本研究选用敌草隆、甲基异柳磷、二氯喹啉酸、氨氯吡啶酸四种农药作为研究对象,制备相应的单克隆抗体,建立了应用于实际样本检测的间接竞争ELISA检测方法和胶体金免疫层析试纸条检测技术,以实现市场高通量快速检测的需求。通过分析敌草隆、甲基异柳磷、二氯
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果蔬作物中农业化学品超标问题切实关系到我国居民健康,特别是常见杀虫剂和除草剂等类型的农药,因使用场景众多、残留检出频繁以及潜在毒性风险等因素而备受关注。对此本研究选用敌草隆、甲基异柳磷、二氯喹啉酸、氨氯吡啶酸四种农药作为研究对象,制备相应的单克隆抗体,建立了应用于实际样本检测的间接竞争ELISA检测方法和胶体金免疫层析试纸条检测技术,以实现市场高通量快速检测的需求。通过分析敌草隆、甲基异柳磷、二氯喹啉酸、氨氯吡啶酸的分子结构式特点,设计并衍生合成相应的半抗原,借助LC-MS/MS进行表征,将药物小分子半抗原与蛋白质分子偶联得到完全抗原,免疫小鼠刺激其产生免疫原性,借助细胞杂交瘤技术得到特异性好、灵敏度高的单克隆抗体,分别为敌草隆抗体1B4、甲基异柳磷抗体2H3、二氯喹啉酸抗体4E3、氨氯吡啶酸抗体8D5,对应的抗体亚型分别为Ig G2b、Ig G2a、Ig G1、Ig G2a,亲和力常数分别为5.37×10~8mol/L、2.83×10~8mol/L、2.57×10~8mol/L、8.37×10~8mol/L,半数抑制浓度(IC50)分别为0.24 ng/m L、1.22 ng/m L、11.47 ng/m L、6.28 ng/m L,同时测得各药物抗体对其结构类似物的药物交叉反应率均小于1%,表明制备的抗体具有高特异性。同时建立了间接竞争ELISA检测方法,针对反应体系的p H值、离子强度、有机溶剂含量对相应的测定条件进行了优化,以得到最佳的参数条件。设计了在实际样本黄瓜、西红柿中的添加回收实验,测得的回收率均在83.53%～99.84%之间,变异系数均小于10.00%,证明本研究建立的间接竞争ELISA检测方法准确性高。基于敌草隆、甲基异柳磷、二氯喹啉酸、氨氯吡啶酸单克隆抗体,对标记溶液p H、标记所用的抗体量和T线包被抗原浓度等做了一系列优化,构建得到检测性能好的胶体金试纸条并用于实际样本的测定。敌草隆金标试纸检测黄瓜样本时的可视化检测区间为2～8 ng/g,样本为包菜时该检测方法的可视化检测区间为25～50 ng/g;甲基异柳磷金标试纸条检测辣椒中甲基异柳磷残留时可视化检测区间为20～40 ng/g,检测黄瓜样本的可视化检测区间为10～20 ng/g;二氯喹啉酸金标试纸条对西红柿、黄瓜样本的可视化检测区间分别为200～400 ng/g、50～200 ng/g;构建的氨氯吡啶酸金标试纸条在西葫芦和西红柿样本中的可视化检测区间分别为100～400 ng/g、50～800 ng/g,本研究建立的金标试纸条均能实现实际样本的现场大批量快速检测。
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