【目的】本课题组前期研究发现芬戈莫德可通过促进M2型小胶质细胞激活发挥抗炎作用,但关于其对脑皮质缺血区新生血管及大脑微血管内皮细胞功能的影响及机制尚不明确,因此,我们将探讨芬戈莫德对脑皮质缺血区新生血管的影响及和对大脑微血管内皮细胞的成管、增生、凋亡等功能的影响及可能机制。【方法】(1)体内实验部分:雄性成年野生型小鼠予光化学法诱导脑缺血模型,分为分空白对照组、单纯造模组、芬戈莫德给药组,造模成功24 h后连续每天腹腔注射芬戈莫德0.3mg/kg;第14 d时处死小鼠取脑组织,予免疫荧光染色(Brdu+CD31)观察各组脑梗死灶边缘区(空白对照组取其对应区域)新生血管情况。(2)体外实验部分:野生型乳鼠取脑组织行小胶质细胞原代培养和内皮细胞原代培养得到实验细胞。予蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测各组小胶质细胞分型指标蛋白Arg-1、CD206、CD16、iNOS的表达,留取各组细胞上清液。将内皮细胞置入缺氧培养箱诱导糖氧剥夺离体脑缺血(Oxygen and Glucose Deprivation,OGD)模型,细胞成管实验检测不同组组内皮细胞的成管数目及成管总长度;Annexin-V-FITC/PI流式细胞术检测各组内皮细胞凋亡情况;Brdu染色观察计数各组内皮细胞增生情况。【结果】1.芬戈莫德能增加脑皮质梗死边缘区新生血管的形成。光化学方法所致脑缺血小鼠模型造模成功并连续每天予腹腔注射芬戈莫德第14 d,通过CD31+Brdu免疫荧光染色结果显示:芬戈莫德治疗组和单纯造模组皮质梗死灶周围区新生血管数量较空白对照组增加,芬戈莫德治疗组较单纯造模组新生血管数量增加更为明显。上述结果表明芬戈莫德能增加脑梗死边缘区新生血管的形成。2.再次验证芬戈莫德通过促进M1型小胶质细胞向M2型转化发挥免疫调节功能并保证后续实验小胶质细胞上清液炎性环境。小胶质细胞被不同药物干预24h:Western Blotting检测结果显示:芬戈莫德干预后CD206、Arg-1等小胶质细胞M2型相关蛋白表达增多,而CD16、iNOS等小胶质细胞M1型相关蛋白表达减少。上述结果说明,芬戈莫德能促进M1型小胶质细胞向M2型转化改善大脑炎性环境,同时保证了后续实验所用到的小胶质细胞上清液的炎性环境。3.芬戈莫德间接影响内皮细胞成管、新生、凋亡功能。我们予不同药物干预小胶质细胞后得到的上清液进一步干预内皮细胞OGD模型24 h:(1)内皮细胞成管实验结果显示:间接给予芬戈莫德可增加内皮细胞成管数目及成管总长度,而直接给药无明显差异,表明芬戈莫德是通过干预小胶质细胞分型间接增强内皮细胞成管能力;(2)Brdu染色实验结果显示:间接给予芬戈莫德能增加Brdu染色阳性细胞数目,但直接给药组无明显影响,说明芬戈莫德能通过能促进M1型小胶质细胞向M2型转化减轻脑组织炎症间接促进内皮细胞的增殖能力;(3)Annexin-V-FITC/PI双染法流式细胞术结果显示:直接和间接给予芬戈莫德均不能减少内皮细胞凋亡,表明芬戈莫德对内皮细胞凋亡无明显影响。【结论】1.芬戈莫德能增加脑皮质梗死边缘区新血管的生成。2.芬戈莫德能通过促进小胶质细胞M1型向M2型转化而改善大脑炎性环境,继而促进脑血内皮细胞增生及成管能力,但不影响内皮细胞的凋亡。