荷载Dbait的纳米粒的构建及其对人脑胶质瘤的放射敏感性影响的实验性研究

来源 :徐州医学院 徐州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aklehigh
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目的:构建荷载Dbait的荧光纳米粒,观察其对人脑胶质瘤U87细胞辐射敏感性的影响,并初步探讨其可能作用机制。   方法:首先采用EDC和NHS缩合法合成RBITC-PAMAM,根据RBITC物质在紫外分光光度计下特有的吸收峰值鉴定RBITC-PAMAM是否合成成功;琼脂糖凝胶电泳法鉴定不同N/P比值对RBITC-PAMAM/Dbait包封率的影响,寻求最佳N/P比值,合成包封稳定的RBITC-PAMAM/Dbait纳米粒;阴离子置换法和DnaseI酶法检测该纳米粒的稳定性;RBITC-PAMAM/Dbait纳米粒转染U87细胞;实验分4组:A组(空白对照组:未转染+0Gy)、B组(单纯转染组:转染+0Gy)、C组(单纯照射组:未转染组+4Gy)、D组(转染+4Gy)。各组经不同干预因素处理后24h、48h,流式细胞仪检测细胞周期分布情况及细胞凋亡;MTT检测各干预因素处理后24h细胞增殖活性,免疫细胞染色检测10Gy照射后24h的γ-H2AX蛋白表达情况。   结果:1.通过紫外分光光度计及琼脂糖凝胶电泳鉴定荧光PAMAM合成成功和在N/P达到8:1时荧光PAMAM包封Dbait稳定;2.荧光显微镜下观察转染效率高达90%。3.(1)流式细胞仪检测各组细胞周期分别情况显示:C组、D组细胞处理后24h出现G2/M期阻滞分别为(33.06±2.60、32.71±2.13)%,与A组、B组相比(23.61±2.34、23.28±2.44)%,差异有统计学意义(P<0.01),D组与C组相比无统计学意义(P>0.05),48h各组细胞周期分布基本相同,C和D组的G2/M期结果分别为:(25.91±2.50)%和(25.82±2.99)%,C与D组相比,无统计意义(P>0.05);24小时A组、B组、D组的凋亡率分别为(2.20±0.13)%、(2.43±0.13)%和(3.97±0.24)%,D组与A组、B组相比有统计意义,C组与D组无统计学意义,随着时间的延长,C组和D组的凋亡率((4.99±0.25)%、(4.95±0.18)%)有所增加,但无统计学意义(p>0.05)。(2)MTT法检测各组细胞增殖活性显示:C组、D组细胞增殖率分别为69.32%,66.35%,两组之间差异无统计学意义(P>0.05),但两组与A组(100%)及B组(93.54%)相比差异均有统计学意义(O<0.05);(3)免疫细胞染色法检测辐射损伤修复相关蛋白γ-H2AX,A组呈弱阳性表达(+),B组与C组均呈中等阳性表达(++),而D组呈强阳性表达(+++)。   结论:1.成功地构建了荷载Dbait的荧光纳米粒(RBITC-PAMAM-Dbait);2。该纳米粒对U87细胞呈现很高的转染效率;3.Dbait可能对U87细胞具有辐射增敏效应。
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