基于酱渣蛋白分析的米曲霉改良研究

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针对目前国内酱渣残留以及酱油蛋白原料利用率低问题,本试验以酱渣为试验材料,分析酱渣蛋白的性质及含量,意在找到配制特异培养基的关键因子,通过诱变、选育优良米曲霉菌株。为合理、有效利用酱渣蛋白以及提高酱油蛋白原料利用率提供新的思路。研究在不同单因素条件下的提取酱渣蛋白,酱渣蛋白提取的最佳工艺条件和参数。以提取的酱渣蛋白,进行定性定量分析,以确定配制特异培养基的关键因子,通过菌种诱变及后期酱油发酵相关指标的测定,选育出优良米曲霉菌株。主要研究结果如下:  (1)根据不同方法提取酱渣蛋白结果的多重比较分析后,采用响应面法对超声辅助碱提法提取工艺进行优化,结果表明:超声功率365W,液料比37∶1(mL∶g),反应体系pH值9.8,提取时间52min,酱渣蛋白的提取率达到73.69%。  (2)通过采用隆丁区分法、凝胶色谱过滤法、HPLC法、电泳法以及HPLC-MS/MS法等技术层层深入,相互验证,测得酱渣混合物中蛋白相对含量由高到低依次是大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白、脂肪氧化酶、胰蛋白酶抑制剂、β-淀粉酶、3-磷酸甘油醛脱氢酶,其相对含量依次为34.29%、31.16%、20.69%、6.20%、4.51%、3.14%。并且这6种蛋白也是大豆分离蛋白中的2s、7s、11s组分的重要组成部分。  (3)通过响应面法对特异性选择培养基配方进行优化,其结果表明,琼脂含量24.01g/L、大豆分离蛋白0.76g/L、磷酸氢二钠0.61g/L、磷酸二氢钾0.31g/L,则K值最大为1.24。  (4)通过对米曲霉菌株H0进行ARTP诱变,随后初筛和复筛,选育出米曲霉菌株H15,其酸性蛋白酶活力192.35U/g,中性蛋白酶活力1816.31U/g,碱性蛋白酶活力3774.82U/g,分别比出发菌株H0增长17.49%、19.08%和10.66%;以米曲霉菌株H15来制曲以及发酵酱油,结果表明对照组H0菌株酿造酱油中呈鲜味的氨基酸浓度为13.81mg/100mL,H15菌株为19.04mg/100mL,比对照组高37.84%;酱油中氨基酸态氮的含量,分别为0.66g/100mL、0.75g/100mL,比对照组高13.64%;从蛋白利用率来看H0、H15分别为78.80%、84.30%,H15菌株比H0菌株酿造酱油的蛋白原料利用率高6.98%。
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