【摘 要】
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我国畜禽养殖中喹乙醇代谢物3-甲基-喹噁啉-2羧酸的药物残留严重威胁着人类健康,同时影响着我国畜禽产品的出口。因此,研制快速检测3-甲基-喹噁啉-2羧酸的方法具有一定的重要
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我国畜禽养殖中喹乙醇代谢物3-甲基-喹噁啉-2羧酸的药物残留严重威胁着人类健康,同时影响着我国畜禽产品的出口。因此,研制快速检测3-甲基-喹噁啉-2羧酸的方法具有一定的重要意义。免疫学快速测定方法是基于抗原与抗体的特异性反应而建立起来的,此法特异性强,灵敏度高,所需成本低,样品预处理简单,分析时间快,多用于样品的初步筛选。采用了五种方法进行3-甲基-喹噁啉-2-羧酸合成研究,包括国内外文献报道的四种合成方法以及结合这四种方法设计的新方法,通过高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱联用法、核磁共振法对合成产物进行鉴定,并对五种合成方法进行比较,结果表明:结合HPLC保留时间、HPLC-MS鉴定以及核磁共振鉴定的结果,确定五种方法所合成物质均为3-甲基-喹噁啉-2-羧酸;五种方法中,新的3-甲基-喹噁啉-2-羧酸合成方法的得率最高,得率为51%,纯度大于99%,同时,此方法操作最为简便,且安全性高。采用活性酯法、碳二亚胺法以及DIC催化方法来合成3-甲基-喹噁啉-2-羧酸人工免疫抗原,采用混合酸酐法来合成人工包被原,通过动物免疫、检测血清发现,使用异于N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)的N,N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)催化剂来合成的MQCA免疫原效果最好,IC50值分别为233.23 ng/mL。并且我们自己合成的MQCA对小鼠血清的抑制效果比购买自Sigma的MQCA的抑制效果好。利用合成的人工免疫原,免疫Balb/c雌性小鼠,通过细胞融合实验来获得杂交瘤细胞株,经ELISA法检测发现阳性孔很少,出现了孔内细胞集落很多,但是分泌抗体很少或基本没有的情况。并且细胞融合率较低。针对细胞数目多而OD值低的现象,分析可能是HAT中A失效或骨髓瘤细胞发生突变。也有可能是免疫原抗原性弱,免疫效果不好。对于原分泌抗体的杂交瘤细胞变为阴性,可能是细胞支原体污染,或非抗体分泌细胞克隆竞争性生长,从而抑制了抗体分泌细胞的生长,也可能是发生了染色体丢失。
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