【摘 要】
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目的:研究喙尾琵琶甲防御液中三个主要的细胞毒活性成分对结直肠肿瘤细胞的增殖抑制活性及作用机制。方法:1.通过MTT法分析样品对人结直肠癌细胞HT-29及人正常结肠上皮细胞CCD841的增殖抑制作用,检测样品对肿瘤细胞的增殖抑制活性,并考察其是否具有选择性。2.采用酶联免疫吸附法检测样品对HT-29肿瘤相关因子TNF-α、IL-10及IL-6表达的影响。3.通过流式细胞术对比样品对两种细胞凋亡的影响
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目的:研究喙尾琵琶甲防御液中三个主要的细胞毒活性成分对结直肠肿瘤细胞的增殖抑制活性及作用机制。方法:1.通过MTT法分析样品对人结直肠癌细胞HT-29及人正常结肠上皮细胞CCD841的增殖抑制作用,检测样品对肿瘤细胞的增殖抑制活性,并考察其是否具有选择性。2.采用酶联免疫吸附法检测样品对HT-29肿瘤相关因子TNF-α、IL-10及IL-6表达的影响。3.通过流式细胞术对比样品对两种细胞凋亡的影响。4.通过流式细胞术探讨样品对HT-29周期的影响。5.采用RT-PCR技术检测样品对细胞Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响。6.应用Western Blot技术检测样品对细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达情况的影响。结果:1.甲基对苯醌、乙基对苯醌和甲基氢醌作用于HT-29及CCD841细胞24h后,均可抑制其增殖,呈现剂量依赖性,但无选择性。2.甲基对苯醌和甲基氢醌均可降低HT-29细胞TNF-α和IL-6的表达,呈现剂量依赖性,且具有显著性的差异（P＜0.01或P＜0.05）;甲基对苯醌的低、高剂量组和甲基氢醌的中、高剂量组可降低IL-10的表达（P＜0.01或P＜0.05）。3.甲基对苯醌和甲基氢醌均能明显促进HT-29和CCD841细胞凋亡,且HT-29细胞的凋亡率要高于CCD841细胞。4.细胞周期检测结果显示样品可降低HT-29细胞G1期占比,提高细胞S期占比,并将细胞阻滞在G2期前。5.RT-PCR和Western Blot结果显示甲基对苯醌和甲基氢醌可上调HT-29细胞Wnt/β-catenin通路中GSK-3β、APC m RNA和蛋白的表达,下调β-catenin、Frizzled 1、c-Myc和Cyclin D1 m RNA和蛋白的表达（P＜0.01或P＜0.05）。结论:喙尾琵琶甲防御液中的主要细胞毒活性成分甲基对苯醌、乙基对苯醌和甲基氢醌对结直肠肿瘤细胞具有显著的增殖抑制作用和促凋亡作用。该类成分可能通过下调Wnt/β-catenin通路相关的β-catenin、Frizzled 1、c-Myc和Cyclin D1 m RNA和蛋白的表达,上调GSK-3β、APC m RNA和蛋白的表达,降低肿瘤相关因子（TNF-α、IL-6、IL-10）的表达发挥其增殖抑制作用。
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