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鸡球虫病是一种危害严重的细胞内寄生虫病，对全世界的养鸡业造成了严重的经济损失。鸡球虫病的防治主要是依靠化学药物和活球虫疫苗的使用（Shirley et al.,2005），然而随着化学药物的使用，药物残留、抗药性虫株的产生以及人们对动物性食品药物残留的担心等诸多问题随即而生，而开发新的化学药物成本又高，同时弱毒球虫疫苗的应用因具有致病性、生产成本高、可能产生“返祖”的现象等弊端而影响养鸡业生产。随着生物技术的发展，新型疫苗的应用研究越来越深入。核酸疫苗具有可靠的安全性，较高的稳定性，便于生产和运输，生产成本低，能诱导机体产生高效的免疫应答等诸多优点。柔嫩艾美耳球虫微线体蛋白2（EtMic2）是由球虫顶复合器微线体分泌的多种蛋白质之一，已有研究表明，EtMic2蛋白在鸡球虫入侵时起着重要的作用（Kawazoe et al.,1992）。鸡IL-18（ChIL-18）是一种具有多向和多层次免疫调节功能的细胞因子，能刺激产生Th1细胞介导的细胞免疫和Th2细胞介导的体液免疫，在宿主防御、抑瘤抗瘤、抗变态反应等方面具有重要作用，是一种良好的免疫增强剂。本研究将柔嫩艾美耳球虫微线体蛋白2基因（EtMIC2）单独和与作为免疫增强剂的ChIL-18基因串联插入到pVAX1真核表达载体中构建DNA疫苗，并检测其对E. tenella攻虫的保护作用。试验具体分为以下几个部分：1. ChIL-18蛋白的表达纯化及多克隆抗体的制备将重组质粒pET-28a(+)-IL-18在大肠杆菌中进行原核表达，重组质粒经IPTG诱导验证表达后，进行大量表达并用Ni柱进行ChIL-18蛋白的纯化。将纯化后的ChIL-18蛋白三次免疫BALB/c小鼠进行多克隆抗体的制备。通过间接ELISA方法测定抗ChIL-18抗体的效价后，将采取并分离的血清作为多克隆抗体使用。2.核酸疫苗重组质粒的构建与表达利用DNA重组技术，分别构建了核酸疫苗pVAX1-MIC2，pVAX1-IL-18和pVAX1-MIC2-IL-18。重组质粒经酶切鉴定正确后，为了验证其在体外的表达，将构建的各重组质粒转染293T细胞，并通过IFA和Western blot方法检测。为了验证其在体内的表达，将3种DNA疫苗注射到昆明小鼠体内，通过检测小鼠血清中EtMic2和ChIL-18特异性抗体的水平验证其在体内表达。3.重组核酸疫苗的免疫保护性试验设立pVAX1-MIC2，pVAX1-IL-18，pVAX1-MIC2-IL-18和pVAX1-MIC2混合pVAX1-IL-18四个免疫组进行免疫保护试验，同时设立pVAX1.0空质粒免疫组和感染非免疫和非感染非免疫对照组，每组20只雏鸡。分别将各重组核酸疫苗以100μg/只的剂量于7、14、21日龄三次经腿部肌肉注射免疫雏鸡。28日龄时，除非感染非免疫组的鸡只外的全部雏鸡经口感染6000个新鲜的E. tenella孢子化卵囊，感染后一周宰杀全部的试验动物，一方面从增重、盲肠病变计分、卵囊排出量和抗球虫指数等指标进行统计，另一方面进行抗体水平检测、脾淋巴细胞检测和细胞因子水平检测等。通过两个方面对构建的DNA疫苗进行保护力大小的评价。结果表明，pVAX1-MIC2，pVAX1-MIC2-IL-18和pVAX1-MIC2混合pVAX1-IL-18免疫组均能增加体重，减轻鸡球虫感染后的盲肠病变和减少卵囊排出量，其中pVAX1-MIC2免疫组的ACI为153，pVAX1-MIC2混合pVAX1-IL-18免疫组的为156，而pVAX1-MIC2-IL-18免疫组的ACI可达171，可见pVAX1-MIC2-IL-18免疫组的保护效果略好。而从抗体水平、脾淋巴细胞和细胞因子水平等方面检测的结果同样表明pVAX1-MIC2-IL-18免疫组的免疫效果要优于其他各免疫组。