LINC00628通过其保守序列与VEGFA启动子的相互作用抑制肝癌细胞迁移和侵袭

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目的探索lncRNA-LINC00628在HCC发生发展中的作用及相关机制。方法1.RT-qPCR检测LINC00628在HCC患者癌与癌旁组织中的表达是否有差异,并进一步检测正常肝细胞系和多种肝癌细胞系中LINC00628的表达水平。2.构建LINC00628过表达及干扰载体,并利用克隆形成、MTS、Transwell小室实验和划痕实验等体外实验检测LINC00628对HCC细胞生物学功能的影响。3.利用RT-qPCR和Western blot技术寻找LINC00628的靶基因,并构建靶基因过表达载体,采用划痕实验和Transwell小室实验检测靶基因对HCC迁移和侵袭功能的影响。4.构建不同长度的VEGFA启动子片段载体,并利用双荧光素酶报告基因实验检测LINC00628对VEGFA启动子的影响。5.通过生物信息学网站分析LINC00628的保守序列,并构建LINC00628保守序列过表达载体,再采用Transwell实验及划痕实验检测该保守序列对HCC细胞迁移侵袭功能的影响。6.利用Western blot检测LINC00628保守序列对VEGFA蛋白水平的影响,双荧光素酶报告基因实验检测该保守序列对VEGFA启动子的影响。7.建立LINC00628过表达的裸鼠肝转移瘤模型,通过HE染色、RT-qPCR、免疫组化染色及Western blot实验在体内验证LINC00628对肝癌细胞转移和相关分子的影响。结果1.LINC00628在临床HCC癌组织标本和肝癌细胞系中呈低表达。2.LINC00628能抑制HCC细胞的迁移侵袭。3.LINC00628能够下调VEGFA的表达。4.过表达VEGFA促进HCC细胞迁移和侵袭。5.LINC00628能够抑制VEGFA的启动子活性。6.LINC00628的保守序列能够抑制HCC细胞的迁移侵袭能力。7.LINC00628的保守序列能够抑制VEGFA的表达,过表达保守序列同样能抑制VEGFA启动子活性。8.过表达LINC00628能促进裸鼠体内肝癌细胞的转移并降低VEGFA的表达。结论LINC00628通过其保守序列与VEGFA启动子的相互作用,从而发挥抑制肝癌细胞迁移和侵袭的作用。
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