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本文研究了从血浆蛋白生产中的废弃物Cohn组分Ⅳ沉淀(CohnⅣ沉淀)中,分离纯化多种有药用价值血浆蛋白的工艺。主要目标为白蛋白(Albumin, HSA)、运铁蛋白(Transferrin, Tf)、α1-蛋白酶抑制剂(α1-antitrypsin,α1-AT)、抗凝血酶-Ⅲ(Antithrombin-Ⅲ, AT-Ⅲ)、结合珠蛋白(Haptoglobin, Hp)等五种血浆蛋白。根据沉淀法和多维层析法相结合的思路,设计分离工艺,首先对沉淀进行预处理,然后通过多维层析技术,实现了五种蛋白的便捷高效分离,并对其分离过程实现了自动化控制。首先研究CohnⅣ沉淀预处理方法,确定用生理盐水溶解,离心和过滤除去固体助滤剂,再用聚乙二醇(Polyethylene glycol, PEG)对蛋白溶液进行沉淀,除去了分子量较大的蛋白杂质,得到CohnⅣ沉淀预处理液。其次研究CohnⅣ沉淀预处理液的初步层析方法。比较了其在凝胶过滤层析,疏水层析和离子交换层析上的分离效果。实验发现凝胶过滤层析和离子交换层析对这五种蛋白的分离效果不佳,无法起到初步筛分作用,而疏水层析的三个洗脱组分中的蛋白成分简单,便于进一步纯化。因此,选择了Octyl Sepharose 4 Fast Flow(Octyl FF)作为初步层析步骤,确定了阶段洗脱的梯度为：20%、50%、100%,得到三个洗脱组分：第一组分主要含Tf;第二组分主要含α1-AT, Hp和部分的Tf;第三组分主要含AT-Ⅲ和HSA。接下来对疏水层析的三个组分进一步层析纯化。第一组分经过DEAE Fast Flow (DEAE FF)纯化,得到Tf产品活性收率为74%。第二组分用DEAE FF分离得到α1-AT产品和含Hp的组分,该组分再经过凝胶过滤层析得到Hp产品。α1-AT和Hp活性收率分别为62%和40%。第三组分用肝素亲和Heparin Sepharose 6 Fast Flow纯化得AT-Ⅲ和白蛋白产品,活性收率分别为65%和87%。最后使用多维组合层析系统,实现了这五种蛋白的自动化分离过程,得到的目标蛋白的活性收率如下：HSA为95%,AT-Ⅲ为70%,Tf为80%,α1-AT为65%,Hp为50%。相对于手动操作,各蛋白的活性回收率提高,工艺时间缩短了5倍。该系统是封闭管道联接,由软件自动控制,节省了人力物力,避免了操作中的污染,减少了蛋白的损失。